活性氧(Reactive oxygen species, ROS)包括超氧自由基、过氧化氢、及其下游产物过氧化物和羟化物等,参与细胞生长增殖、发育分化、衰老和凋亡以及许多生理和病理过程。正常情况下,细胞内抗氧化防御系统与氧自由基处于平衡状态,细胞内活性氧(ROS)水平维持在较低的生理范围;在病理情况下,细胞内抗氧化系统与氧自由基的平衡被打破,细胞内活性氧水平过多,就可破坏线粒体酶类、脂类和核酸,使机体出现氧化应激。本试剂盒提供了一荧光测定法,用于直接定量检测组织活性氧。其原理是DCFHDA ROS 探针为还原型二氯荧光素 (2',7'-dichlorodihy drofluores cin diacetate, DCFH-DA)可扩散通过线粒体膜,在线粒体内被酯酶水解,形成无荧光的DCFH,DCFH 迅速与ROS反应生成绿色荧光物—氧化型二氯荧光素(2', 7'-dichlo rofluorescin,DCF),具有488/520nm 的大激发/发射波长。绿色荧光强度与组织内活性氧水平成正比,检测DCFHDA产物的荧光就可以知道组织内活性氧的水平。
荧光分光光度计、荧光酶标仪或多功能酶标仪、恒温培养箱、分析天平
全黑96孔板、可调节式移液枪及枪头
低温离心机、制冰机
纯水、PBS
匀浆器或研钵
1. 实验过程中请穿戴实验服、口罩和乳胶手套。请按照生物实验室的国家安全规定进行实验,尤其是在检测血样或其他体液时。
2. 本试剂盒仅用于实验室科学研究,如果本试剂盒用于临床诊断或任何其他用途,我们将不对任何后果负责。
3. 本试剂盒应在有效期内使用,并请严格按照说明书进行存储。
4. 不同批次号、不同厂家之间的组分不要混用;否则,可能导致结果异常。
5. 勤换吸头,避免各组分之间的交叉污染。
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答:如果能够排除下面的几个问题,那么问题多半出现在一抗和抗原制备上。
1、二抗的HRP 活性太强,将底物消耗光;
2、ECL底物中H2O2不稳定,失活;
3、ECL底物没覆盖到相应位置;
4、一抗选择不当;
5、二抗失活。
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