亚硝酸还原酶(Nitrite reductase,NiR)是一类能催化亚硝酸盐还原的酶,是亚硝态氮还原过程中的关键酶。NiR广泛存在于微生物及植物体内,在自然界氮素循环过程中发挥着重要作用,可以将亚硝酸盐降解为NO或 NH3,从而减少环境中亚硝态氮的积累,降低因亚硝酸盐累积而造成的对生物体的毒害作用。本试剂盒提供了一种简单的比色法来检测NiR。其原理是亚硝酸盐(NO2—)能够在酸性条件下,与对–氨基苯磺酸及α-萘胺定量生成红色偶氮化合物;生成的红色偶氮化合物在540nm有大吸收峰。亚硝酸还原酶可将NO2—还原为NO,使样本中参与重氮化反应生成紫红色化合物的NO2-减少,即540nm处吸光值减少。通过测定540nm处的吸光值的变化可反映亚硝酸还原酶的活性。
酶标仪或可见光分光光度计(能测540nm处的吸光值)以及恒温箱
96孔板或微量玻璃比色皿、可调节式移液枪及枪头
低温离心机、制冰机
去离子水
匀浆器(如果是组织样本)
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答:如果能够排除下面的几个问题,那么问题多半出现在一抗和抗原制备上。
1、二抗的HRP 活性太强,将底物消耗光;
2、ECL底物中H2O2不稳定,失活;
3、ECL底物没覆盖到相应位置;
4、一抗选择不当;
5、二抗失活。
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