胰蛋白酶(EC 3.4.4.4),是蛋白酶的一种,从牛、羊、猪的胰脏提取的一种丝氨酸蛋白水解酶。在脊椎动物中,作为消化酶而起作用。胰蛋白酶选择性水解变性蛋白质中由赖氨酸或精氨酸的羧基所构成的肽链,是一种重要的消化酶。此外,胰蛋白酶还广泛应用于脓胸、血胸、外科炎症、溃疡、创伤性损伤等所产生的局部水肿、血肿及脓肿等的辅助治疗。本试剂盒提供了一种简单、快速的胰蛋白酶检测方法,其检测原理是:胰蛋白酶催化水解TAME的酯键,释放出的游离羧基与反应体系中的氢氧化钠发生中和反应,导致溶液的pH值降低,以苯酚红为指示剂,测定溶液在555nm处吸收值的变化,可以快速测得胰蛋白酶活性数据。胰蛋白酶活性在一定范围内与555nm处吸收值的降低呈良好的线性关系。
酶标仪或可见光分光光度计(能测555nm处的吸光度)
恒温箱、制冰机、低温离心机
96孔板或微量玻璃比色皿、可调节式移液枪及枪头
去离子水
匀浆器
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答:可能的原因有:
1、胶浓度不对,不同浓度的胶跑出的蛋白条带的位置可能有所偏差,可以调整浓度;
2、抗体孵育不充分,建议增加抗体浓度,延长孵育时间;
3、酶失活,建议直接将酶和底物进行混合,如果不显色则说明酶失活了。选择在有效期内、有活性的酶联物;
4、目的蛋白存在翻译后修饰或剪切体,建议查询相关文献确定;
5、标本中不含靶蛋白或靶蛋白含量太低,建议设置阳性对照比对结果,增加标本上样量。
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