APX(EC.1.11.1.11)是植物清除活性氧的重要抗氧化酶之一,也是抗坏血酸代谢的关键酶之一。APX 具有多 种同功酶,分别定位于叶绿体、胞质、线粒体、过氧化物和乙醛酸体,以及过氧化体和类囊体膜上。APX 催化H2O2氧化AsA,是植物AsA 的主要消耗者。APX 的活性直接影响到AsA 的含量,APX 与 AsA 具有一定的负相关性。本试剂盒提供了一种简便的比色测定法,用于测定样本中的APX活性。其原理是APX 催化H2O2氧化AsA,通过测定AsA氧化速率,来计算得APX活性。
酶标仪或紫外分光光度计(能测290nm处的吸光度)及水浴锅
96孔UV微孔板或微量石英比色皿、可调节式移液枪及枪头
制冰机、低温离心机
去离子水
匀浆器
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答:可能是由于培养条件不适、基因突变、药物作用等原因引起的。
解决方法:
1、优化培养条件,如调整温度、pH值、气体比例等;
2、观察细胞形态和生长情况,及时发现凋亡迹象;
3、对于凋亡严重的细胞株,可以尝试进行基因检测和药物筛选,以找到引起凋亡的原因。
答:可能的原因有:
1、目的蛋白有多个修饰位点,本身可以呈现多条带,建议查阅文献或进行生物信息学分析,获得蛋白序列的修饰位点信息,通过去修饰确定蛋白实际大小;
2、样本处理过程中目的蛋白发生降解,建议加入蛋白酶抑制剂;样本处理时在冰上操作;
3、杂蛋白多,建议处理目的蛋白;
4、抗体特异性不强,建议使用特异性强的抗体;
5、抗体孵育时间过久,建议减少抗体孵育时间;
6、二抗与抗原有交叉反应,建议选择合适的封闭物;
7、二聚体或多聚体存在,建议增加蛋白质变性过程及强度;
8、底物显色与曝光时间过长,建议缩短显色及曝光的时间。
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