抗氧化剂在防止自由基和其他潜在有毒氧化物质的形成和清除方面发挥着重要作用。总抗氧化状态（TAS）指抗氧化系统内抗氧化剂清除自由基产生抗氧化作用的能力。正常情况下，体内的抗氧化系统不断清除过多的自由基，使人体内总抗氧化能力与自由基产生保持平衡。总抗氧化能力降低，代表机体清除自由基的能力减弱。总抗氧化能力的测定可以通告机体对自由基的平衡能力，有利于掌握机体的防御能力。因此检测体内总抗氧化能力就显得异常重要。本试剂盒提供了一种简便的比色测定法，用于测定样本中的总抗氧化能力。其原理是在酸性环境下，抗氧化物质还原Fe³⁺-三吡啶三吖嗪(Fe³⁺-TPTZ)产生蓝色的Fe²⁺-TPTZ，在593nm测定Fe²⁺-TPTZ的含量，即可获得样品中的总抗氧化能力。

酶标仪或可见光分光光度计（能测593nm处的吸光度）

96孔板或微量玻璃比色皿、可调节式移液枪及枪头

低温离心机、制冰机

去离子水

匀浆器（如果是组织样本）

注意：各组分（小管试剂）开盖前，请先低速离心。

液体试剂均为即用型。

阳性对照：加入1mL提取液来溶解，混匀得到母液。然后取0.1mL母液加到0.9mL提取液中混匀。浓度是 0.1mg/mL，4℃保存。

工作液的配制：临用前配制，将试剂一、试剂二、试剂三按 10:1:1 的比例混合，现配现用。

动物组织：称取0.1g样本，加入1mL 提取液，冰浴匀浆，转移到1.5mL EP管中，10,000g，4℃离心10min，取上清液于新离心管中，置冰上检测。

植物组织：称取0.1g样本，加入1mL提取液捣碎，冰浴超声波破碎 5min（功率20%或200W，超声3s，间隔7s，重复30次），转移到1.5mL EP管中，10,000g，4℃ 离心10min，取上清液于新离心管中，置冰上检测。

细胞或细菌：收集500万细胞或细菌到离心管内，用冷PBS清洗细胞，离心后弃上清，加入1mL提取液，冰浴超声波破碎5min（功率20%或200W，超声3s，间隔7s，重复30次），转移到1.5mL EP管中，10,000g，4℃ 离心10min，取上清液于新离心管中，置冰上检测。

血清、血浆或尿样：直接检测。

注意：1. 推荐使用新鲜样本，如果不立即进行实验，样本可在-80℃保存1个月。

2. 不能用EDTA作为血浆样品的抗凝剂。样品中也不能含有DTT、巯基乙醇、Tween、Triton和NP-40等去垢剂和DTT、巯基乙醇等影响氧化还原反应的还原剂。

3. 如需测定蛋白浓度，推荐使用BCA法蛋白质定量试剂盒进行样本蛋白质浓度测定。

1. 酶标仪或可见光分光光度计预热30min以上，调节波长到593nm，可见光分光光度计去离子水调零。

2. 样本测定（在96孔板或微量玻璃比色皿中依次加入下列试剂）：

3. 充分混匀，室温反应5min，于593nm测定吸光值，计算ΔA_测=A_测定-A_空白（空白孔只需做1 个）

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验，如果A_测定大于1.5，样本可用提取液进一步稀释，计算结果乘以稀释倍数。

1.总抗氧化能力计算标准曲线公式： y=4.4664x+0.0685，R² = 0.9986，其中y为Fe²⁺终浓度(μmol/mL)，x为吸光值差值ΔA， 将ΔA_测带入标准曲线公式，求得y(μmol/mL)。

2.样本中TAS计算：

单位定义：样本的抗氧化能力以达到同样吸光度变化值（ΔA）所需的标准液Fe²⁺离子浓度（μmol/mL）表示。

（1）按样本鲜重计算

TAS（μmol/g 鲜重）=y×V_样÷(V_样÷V_样总×W)×n=y÷W×n 

（2）按样本蛋白浓度计算

TAS（μmol/mg prot）=y×V_样÷(V_样×Cpr)×n=y÷Cpr×n

（3）按细胞或细胞数量计算

TAS（μmol/10⁴ cells）=y×V_样÷(V_样÷V_样总×细胞数量)×n=y÷细胞数量×n

（4）按液体体积计算

TAS（μmol/mL）=y×V_样÷V_样×n=y×n

V_样：反应中样品体积，0.01 mL；V_样总：加入提取液体积，1 mL；W：样品质量，g；n：样本稀释倍数；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；细胞数量：以 10⁴为单位。