顺乌头酸酶(Aconitase,ACO;EC 4.2.1.3),一种含Fe-S簇的酶,在三羧酸循环中,催化从柠檬酸经顺乌头酸生成异柠檬酸的可逆性异构化,对维持三羧酸循环及乙醛酸循环的顺利进行起着重要作用。真核细胞中ACO主要存在于胞浆与线粒体中,细菌中也含有ACO。柠檬酸本身不易氧化,在顺乌头酸酶作用下,通过脱水与加水反应,使羟基由β碳原子转移到α碳原子上,生成易于脱氢氧化的异柠檬酸,为进一步的氧化脱羧反应作准备。本试剂盒提供了一种简单、方便、快速的ACO活性检测方法,其原理是ACO催化柠檬酸转化成异柠檬酸,异柠檬酸氧化脱羧将NAD+还原生成NADH,导致340nm处光吸收上升,根据NADH的生成速率可计算获得顺乌头酸酶的活性。
酶标仪或紫外分光光度计(能测340nm处的吸光度)
96孔UV板或微量石英比色皿、可调节式移液枪及枪头
水浴锅、制冰机,低温离心机
去离子水
匀浆器(如果是组织样本)
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答:一般5×10^6就足够。
答:可能的原因有:
1、细胞中不表达这种蛋白质,换一种细胞;
2、抗体不能识别目标蛋白,多看看说明,是否有问题;
3、可能是没有保持低温操作,样品保存不当,样品放置时间过长;
4、细胞中的蛋白质被酶降解掉了,可加入蛋白酶抑制剂,抑制蛋白酶活性。
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