ProDH是存在于线粒体内的催化脯氨酸降解的关键酶。脯氨酸是分布广泛的一种渗透物质,在胁迫条件下很多植物可以通过增加合成、减少降解而在体内累积大量脯氨酸,降低ProDH活性对于调节渗透平衡、防止渗透胁迫对植物造成伤害、清除自由基、保护细胞结构具有重要意义。本试剂盒提供了一种简单、方便、快速的ProDH活性检测方法,其原理是ProDH催化脯氨酸脱氢生成吡咯啉-5-羧酸,脱下的氢通过吩嗪二甲酯硫酸(PMS)传递,从而还原 2,6-二氯靛酚(2,6-DCPIP)。2,6-DCPIP在600nm处具有特征吸收峰,通过检测600nm处吸光值的吸光值的变化反映酶活性的高低。
酶标仪或分光光度计(能测600nm处的吸光度)
96孔板或微量比色皿、可调节式移液枪及枪头
水浴锅、制冰机,低温离心机
去离子水
匀浆器(如果是组织样本)
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答:可能的原因包括培养基质量、血清质量、温度、pH值、气体比例等。
解决方法有:
1. 使用高质量的培养基和血清,确保其无菌、无支原体污染,并保证在保质期内使用;
2. 培养箱温度和气体比例要保持稳定,定期校准;
3. 每天检查并记录细胞培养的环境参数,如温度、pH值、气体比例等,以便及时发现问题;
4. 定期更换培养基,保持细胞营养充足;
5. 对于生长缓慢的细胞株,可以尝试进行克隆筛选或更换培养基。
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