本预制胶为 Bis-Tris 中性缓冲体系,胶板为塑料材质,具有优良的分离效果,电泳后条带清晰锐利,预制胶凝胶稳定性好,为使用者带来更安全,更高效,更便捷的科研使用体验。
本预制胶提供不同浓度的梯度胶和固定浓度胶,梯度胶有 4-20%,4-12%,固定浓度胶有 8%,10%,12%三种,10孔胶的大上样量为 50μl,15 孔胶的大上样量为 30μl。
预制胶胶板兼容目前市场大多数电泳槽,包括:Bio-Rad Mini-PROTEAN (II/3/Tetra System);
Hoefer Mighty Small (SE250/SE260/SE280);Life Technology Novex Mini-Cell;北京六一 DYCZ-25E、DYCZ-24DN、DYCZ-24K、DYCZ-24KS、DYCZ-24KF;君意东方JY-SCZ2+;天能 VE180;以及其它能容纳胶板宽度在 10cm 的电泳槽。
1. 准备电泳缓冲液:取一包电泳缓冲液粉末(MOPS-SDS电泳缓冲液即用粉末,货号:PMK0203)溶解在 1L 的去离子水中。
2. 将预制胶从包装袋中取出撕掉胶板底部的胶条,缓慢地拔出梳子,将预制胶固定在电泳槽中。电泳槽内槽倒入足够的电泳缓冲液,内槽电泳缓冲液覆盖上样孔,外槽的电泳液加到 1/3 液面处即可,高不可漫过胶板。
3. 上样:用5XSDS-PAGE蛋白上样缓冲液(货号:PMK0012)处理样品,移液器吸取样品后枪头以垂直方向 轻轻插入到上样孔中即可上样。注意枪头不要戳破凝胶,也不要过度插入梳孔使胶板变型造成漏液。
4. 电泳条件:推荐电压160V,当溴酚蓝指示带电泳至凝胶底部,或实验预定位置时,即可结束电泳。
5. 电泳结束,取出凝胶。使用撬具或其他合适的工具插入到胶板两侧之间的空隙中,用撬具慢慢地
上下撬动胶板,重复上述操作,撬动上、中、下三个不同的位置直至胶板两侧完全打开。
6. 胶板打开后,凝胶可能粘在胶板的任意一侧,取下无凝胶的一侧,将另一侧的胶板倾斜至水中,轻轻拨动凝胶,使凝胶自由掉落到装有去离子水的器皿中晃动清洗凝胶,然后取出进行染色或转膜保存条件2-8℃保存,自生产之日起 12 个月有效。
1. 本预制胶不能置于 0℃以下冷冻,否则凝胶会冻裂。
2. 电泳缓冲液建议使用次数不超过 3 次,如长时间不用请冷藏保存。
3. Bio-Rad 电泳槽使用时将框架内绿色硅胶密封条取出,将其平坦的一面朝外并重新装回凹槽中压紧。
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答:可能的原因有:
1、胶浓度不对,不同浓度的胶跑出的蛋白条带的位置可能有所偏差,可以调整浓度;
2、抗体孵育不充分,建议增加抗体浓度,延长孵育时间;
3、酶失活,建议直接将酶和底物进行混合,如果不显色则说明酶失活了。选择在有效期内、有活性的酶联物;
4、目的蛋白存在翻译后修饰或剪切体,建议查询相关文献确定;
5、标本中不含靶蛋白或靶蛋白含量太低,建议设置阳性对照比对结果,增加标本上样量。
答:可能的原因有:
1、目的蛋白有多个修饰位点,本身可以呈现多条带,建议查阅文献或进行生物信息学分析,获得蛋白序列的修饰位点信息,通过去修饰确定蛋白实际大小;
2、样本处理过程中目的蛋白发生降解,建议加入蛋白酶抑制剂;样本处理时在冰上操作;
3、杂蛋白多,建议处理目的蛋白;
4、抗体特异性不强,建议使用特异性强的抗体;
5、抗体孵育时间过久,建议减少抗体孵育时间;
6、二抗与抗原有交叉反应,建议选择合适的封闭物;
7、二聚体或多聚体存在,建议增加蛋白质变性过程及强度;
8、底物显色与曝光时间过长,建议缩短显色及曝光的时间。
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