本预制胶为 Bis-Tris 中性缓冲体系,胶板为塑料材质,具有优良的分离效果,电泳后条带清晰锐利,预制胶凝胶稳定性好,为使用者带来更安全,更高效,更便捷的科研使用体验。
本预制胶提供不同浓度的梯度胶和固定浓度胶,梯度胶有 4-20%,4-12%,固定浓度胶有 8%,10%,12%三种,10孔胶的大上样量为 50μl,15 孔胶的大上样量为 30μl。
预制胶胶板兼容目前市场大多数电泳槽,包括:Bio-Rad Mini-PROTEAN (II/3/Tetra System);
Hoefer Mighty Small (SE250/SE260/SE280);Life Technology Novex Mini-Cell;北京六一 DYCZ-25E、DYCZ-24DN、DYCZ-24K、DYCZ-24KS、DYCZ-24KF;君意东方JY-SCZ2+;天能 VE180;以及其它能容纳胶板宽度在 10cm 的电泳槽。
1. 准备电泳缓冲液:取一包电泳缓冲液粉末(MOPS-SDS电泳缓冲液即用粉末,货号:PMK0203)溶解在 1L 的去离子水中。
2. 将预制胶从包装袋中取出撕掉胶板底部的胶条,缓慢地拔出梳子,将预制胶固定在电泳槽中。电泳槽内槽倒入足够的电泳缓冲液,内槽电泳缓冲液覆盖上样孔,外槽的电泳液加到 1/3 液面处即可,高不可漫过胶板。
3. 上样:用5XSDS-PAGE蛋白上样缓冲液(货号:PMK0012)处理样品,移液器吸取样品后枪头以垂直方向 轻轻插入到上样孔中即可上样。注意枪头不要戳破凝胶,也不要过度插入梳孔使胶板变型造成漏液。
4. 电泳条件:推荐电压160V,当溴酚蓝指示带电泳至凝胶底部,或实验预定位置时,即可结束电泳。
5. 电泳结束,取出凝胶。使用撬具或其他合适的工具插入到胶板两侧之间的空隙中,用撬具慢慢地
上下撬动胶板,重复上述操作,撬动上、中、下三个不同的位置直至胶板两侧完全打开。
6. 胶板打开后,凝胶可能粘在胶板的任意一侧,取下无凝胶的一侧,将另一侧的胶板倾斜至水中,轻轻拨动凝胶,使凝胶自由掉落到装有去离子水的器皿中晃动清洗凝胶,然后取出进行染色或转膜保存条件2-8℃保存,自生产之日起 12 个月有效。
1. 本预制胶不能置于 0℃以下冷冻,否则凝胶会冻裂。
2. 电泳缓冲液建议使用次数不超过 3 次,如长时间不用请冷藏保存。
3. Bio-Rad 电泳槽使用时将框架内绿色硅胶密封条取出,将其平坦的一面朝外并重新装回凹槽中压紧。
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可能的原因有:
1.使用了戊二醇固定——再固定后荧光染色前进行荧光淬灭,染色前检查自发荧光;
2.材料本身有自发荧光——设立阴性对照,通过降低荧光显微镜的参数来消除背景染色;
3.细胞成分中能够产生自发荧光的分子(如核黄素、细胞色素等)含量高——尽量选用较亮的荧光抗体,采取荧光本底补偿的方法。
可能的原因有:
1.荧光染料的光谱重叠——选择光谱分离良好的荧光染料、进行顺序染色和成像,减少串色干扰;
2.滤光片设置不当——优化滤光片设置,使用窄带滤光片。
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