本产品主要成分为Tris-base 、甘氨酸和SDS。本产品的使用非常简单,只需将您使用的常规TG电泳缓冲液系统更换为本产品的稀释液,调整电压后进行电泳即可,无需添加任何实验步骤。同时本产品可重复使用4-5次,既可节省您宝贵的时间也可降低您的实验成本。
a.具体使用方式按照相应实验需要直接添加即可。
c.电泳完成后收集电泳槽内、外槽电泳液,4℃保存,可重复使用4-5次,但如发生浑浊请勿使用。
d.应用本产品所进行的SDS-PAGE的结果显示,本产品的应用会使蛋白的分辨范围发生变化,同等浓度的凝胶,其分辨的分子量要小于使用TG电泳缓冲液,因此在选择凝胶浓度时请适当参照下表,可在一定程度.上有效选择凝胶浓度进行电泳。
1.将适量的本产品加入到电泳槽的内、外槽中, 调整电源为恒压200-250 V进行电泳。电泳指示剂溴酚蓝至凝胶底部,所需时间约20- 30 min。
2.本产品中含有SDS,是为变性胶电泳设计的,对于不含SDS的天然胶电泳不适用。
3.对人体有害,操作时请务必带手套。如溅到皮肤上,请立即用大量水冲洗。
4.本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
5.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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答:可能的原因有:
1、目的蛋白有多个修饰位点,本身可以呈现多条带,建议查阅文献或进行生物信息学分析,获得蛋白序列的修饰位点信息,通过去修饰确定蛋白实际大小;
2、样本处理过程中目的蛋白发生降解,建议加入蛋白酶抑制剂;样本处理时在冰上操作;
3、杂蛋白多,建议处理目的蛋白;
4、抗体特异性不强,建议使用特异性强的抗体;
5、抗体孵育时间过久,建议减少抗体孵育时间;
6、二抗与抗原有交叉反应,建议选择合适的封闭物;
7、二聚体或多聚体存在,建议增加蛋白质变性过程及强度;
8、底物显色与曝光时间过长,建议缩短显色及曝光的时间。
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