非还原SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(5x)
货号:PMK0012B
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价格:
15.00
规格:
1ml
5ml
15ml
货期:
现货
如果起始时细胞或组织的用量较大,基因组DNA含量较高,煮沸3-5分钟后有可能仍然比较粘稠或者有粘稠状的半透明物体。
Details
产品详情
  • 产品简介

    SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(SDS-PAGE Sample Loading Buffer,5X),是一种经过改良的以溴酚蓝为染料,5倍浓缩的蛋白上样缓冲液。可以用于常规的SDS-PAGE蛋白样品的上样。

  • 使用说明

    1.在室温或不超过37℃的水浴中溶解SDS-PAGE上样缓冲液(5X)。水浴溶解后立即室温存放,尽量避免长时间置于水浴中。
    2.按照每4微升蛋白样品加入1微升蛋白上样缓冲液(5X)的比例,混合蛋白样品和蛋白上样缓冲液(5X)。
    3.100℃或沸水浴加热3-5分钟,以充分变性蛋白
    注意:如果起始时细胞或组织的用量较大,基因组DNA含量较高,煮沸3-5分钟后有可能仍然比较粘稠或者有粘稠状的半透明物体。此时需要再煮沸5-10分钟或者加入适量稀释成1X的蛋白上样缓冲液后再煮沸3-5分钟。充分煮沸后一方面可以使结合在基因组DNA上的蛋白充分释放,同时会导致基因组DNA的部分断裂从而使粘稠感消失,这样就不会影响后续的上样操作了。
    4.冷却到室温后,直接上样到SDS-PAGE胶加样孔内即可。
    5.通常电泳至蓝色染料到达胶的底端处附近即可停止电泳。

  • 注意事项

    SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(5X)中含少量DTT,有轻微刺激性气味,但不含剧毒的巯基乙醇。
    SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(5X)必须完全溶解后再使用。
    本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
    为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

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Product Q&A FAQ
产品问答FAQ
  • Western Blot(WB)实验中胶片是一片空白,是怎么回事?

    答:如果能够排除下面的几个问题,那么问题多半出现在一抗和抗原制备上。

    1、二抗的HRP 活性太强,将底物消耗光;

    2、ECL底物中H2O2不稳定,失活;

    3、ECL底物没覆盖到相应位置;

    4、一抗选择不当;

    5、二抗失活。


  • Western Blot(WB)实验中背景高咋回事?

    答:可能的原因有:

    1、膜没有完全均匀湿透,建议 使用100% methanol浸透膜;

    2、洗膜不充分,可以增加洗液体积和洗涤次数;

    3、电极不平衡或者加样位置偏斜,可以调整电极和加样;

    4、封闭物用量不足,可以提高封闭物浓度,孵育时保证封闭液完全浸没转印膜;

    5、封闭物使用不当,比如检测生物素标记的蛋白时不可用脱脂奶粉封闭;

    6、封闭时间不够,一般情况下室温37度封闭1小时以上或者4度封闭过夜;

    7、抗体非特异性结合,可以降低抗体浓度,减少孵育时间;

    8、一抗稀释度不适宜,可以对抗体进行滴度测试,选择适宜的抗体稀释度;

    9、一抗孵育的温度偏高,建议4℃结合过夜;

    10、抗体浓度过高或洗涤不够,建议降低抗体浓度,增加洗涤次数和时间;

    11、化学显色底物过多,建议按说明书加入适量的显色底物。


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