5X SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(无气味)-湖北普美生物科技有限公司

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产品详情

产品简介

5X SDS-PAGE 蛋白上样缓冲液(无气味)是一种经过改良的更加安全、更加健康的无气味的以溴酚蓝为染料，5倍浓缩的蛋白上样缓冲液样。本产品使用了无气味、水溶性更稳定、还原能力相近的还原剂[三(2-羧乙基)膦盐酸盐,TCEP]替代了有气味的 D-二硫苏糖醇(DTT)或β-巯基乙醇(2-Mercaptoethanol)，从而可以确保本SDS-PAGE 蛋白上样缓冲液在正常使用或加热时都不会有异味，使蛋白上样操作更加安全健康。
使用步骤

1. 在室温或不超过37℃的水浴中溶解5X SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(无气味)。水浴溶解后立即室温存放，尽量避免长时间置于水浴中。
2. 按照每4ul蛋白样品加入1ul 5X SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(无气味)的比例，混合蛋白样品和5X SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(无气味)。如果蛋白样品浓度过高，可用双蒸水稀释。
3. 95℃水浴加热5-10分钟，以充分变性蛋白。
4. 冷却到室温后，经10000~14000g离心2-5min，取上清直接上样到 SDS-PAGE 胶加样孔内即可电泳。
5. 通常电泳至蓝色染料到达胶的底端处附近即可停止电泳。
注意事项

1. 本产品用于蛋白变性时，建议95ºC水浴或PCR仪加热5分钟，温度过高(如100ºC)或时间过长(如超过15分钟)，有可能会导致蛋白降解或上样缓冲液中指示剂的颜色异常。
2. 5X SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(无气味)不含剧毒的巯基乙醇和有刺激性气味的DTT，但还原效果一致，对于蛋白样品的处理效果和电泳效果一致。
3. 5X SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(无气味)必须完全溶解后再使用。建议根据使用量和频率分装冻存，应避免反复冻融。
4. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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PMK0012C

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Product Q&A FAQ

产品问答FAQ

Western Blot（WB）实验中胶片是一片空白，是怎么回事？

答：如果能够排除下面的几个问题，那么问题多半出现在一抗和抗原制备上。
1、二抗的HRP 活性太强，将底物消耗光；
2、ECL底物中H2O2不稳定，失活；
3、ECL底物没覆盖到相应位置；
4、一抗选择不当；
5、二抗失活。
Western Blot（WB）实验中背景高咋回事?

答：可能的原因有：
1、膜没有完全均匀湿透,建议使用100% methanol浸透膜；
2、洗膜不充分，可以增加洗液体积和洗涤次数；
3、电极不平衡或者加样位置偏斜，可以调整电极和加样；
4、封闭物用量不足，可以提高封闭物浓度，孵育时保证封闭液完全浸没转印膜；
5、封闭物使用不当，比如检测生物素标记的蛋白时不可用脱脂奶粉封闭；
6、封闭时间不够，一般情况下室温37度封闭1小时以上或者4度封闭过夜；
7、抗体非特异性结合，可以降低抗体浓度，减少孵育时间；
8、一抗稀释度不适宜，可以对抗体进行滴度测试，选择适宜的抗体稀释度；
9、一抗孵育的温度偏高，建议4℃结合过夜；
10、抗体浓度过高或洗涤不够，建议降低抗体浓度，增加洗涤次数和时间；
11、化学显色底物过多，建议按说明书加入适量的显色底物。
Western Blot（WB）实验中为啥条带形状不好看？

答：可能的原因有：
1、胶凝的不均匀或聚合不好，建议灌胶前将溶液充分混匀；
2、某些样品盐浓度较高，建议除盐或将样品盐浓度调成一致；
3、缓冲液陈旧，成分改变,可以重配；
4、凝胶下面有气泡,电泳前要先将气泡赶走；
5、电泳时温度过高，可以降低电流或电压；
6、样品中含有不溶性颗粒，建议样品充分搅拌混匀。