本产品转膜缓冲液可以用于Western湿法电转膜。本产品主要组分为20mM Tris,192mM甘氨酸,pH 8.2-8.6(25℃),不含SDS和甲醇,便于储存、操作简单。使用时将粉末全部溶解于 800 ml 蒸馏水中,补加200ml甲醇,即配成1L 1×转膜缓冲液。本转膜缓冲液可以回收,回收后可以再使用 2~3 次。
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答:可能的原因有:
1、目的蛋白有多个修饰位点,本身可以呈现多条带,建议查阅文献或进行生物信息学分析,获得蛋白序列的修饰位点信息,通过去修饰确定蛋白实际大小;
2、样本处理过程中目的蛋白发生降解,建议加入蛋白酶抑制剂;样本处理时在冰上操作;
3、杂蛋白多,建议处理目的蛋白;
4、抗体特异性不强,建议使用特异性强的抗体;
5、抗体孵育时间过久,建议减少抗体孵育时间;
6、二抗与抗原有交叉反应,建议选择合适的封闭物;
7、二聚体或多聚体存在,建议增加蛋白质变性过程及强度;
8、底物显色与曝光时间过长,建议缩短显色及曝光的时间。
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