脱脂奶粉一般用于Western Blot实验中作为封闭液。使用脱脂奶粉配制成溶液作为封闭剂或抗体稀释溶液,可以有效减少一抗或二抗和膜的非特异性结合,降低背景,增强信噪比。常用TBST作为溶剂,建议使用浓度3%-5%。本产品常温保存与运输,有效期为12个月。使用时现配现用,按需配制,溶液不可长期保存。
1.Naying S ,Zhengdan L ,Xi L , et al.Pathological observation and transcriptomic analysis of thymus injury in PRRSV-infected piglets.[J].Veterinary research communications,2023,47(4):1949-1962.(IF 2.2)
答:可能的原因有:
1、目的蛋白有多个修饰位点,本身可以呈现多条带,建议查阅文献或进行生物信息学分析,获得蛋白序列的修饰位点信息,通过去修饰确定蛋白实际大小;
2、样本处理过程中目的蛋白发生降解,建议加入蛋白酶抑制剂;样本处理时在冰上操作;
3、杂蛋白多,建议处理目的蛋白;
4、抗体特异性不强,建议使用特异性强的抗体;
5、抗体孵育时间过久,建议减少抗体孵育时间;
6、二抗与抗原有交叉反应,建议选择合适的封闭物;
7、二聚体或多聚体存在,建议增加蛋白质变性过程及强度;
8、底物显色与曝光时间过长,建议缩短显色及曝光的时间。
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