无蛋白快速封闭液是一种即用型,高效快速应用于Western Blot实验的封闭液。封闭时间仅需15-30分钟,效果优于脱脂奶粉、BSA、酪蛋白等传统封闭液,获得更高的信号,更低的背景值,信噪比高。该试剂不含有哺乳动物来源的蛋白成分,避免与抗体发生交叉反应,适用于辣根过氧化物酶(HRP)、碱性磷酸酶(AP)和生物素标记的二抗。本产品中添加了不影响HRP和AP活性的防腐剂,不会干扰HRP或AP标记二抗的检测。同时本产品不含生物素,不会干扰基于生物素的检测。
1、通常本产品用于PVDF膜及NC膜的封闭时间为15-30分钟。对于一些背景非常高的抗体,可以尝试将封闭时间延长为30-60分钟。此外,如有特殊需要,也完全可以4℃封闭过夜。
2、由于没有任何一种封闭液是适用于所有实验体系的,因此对于一些特殊的实验,可能需要根据具体情况考虑使用其它更合适的封闭液。
3、取放PVDF膜和NC膜应使用平头镊子,并仅轻轻夹取其边角,操作过程须避免膜表面产生划痕、折痕或压痕等痕迹。
4、PVDF膜一经甲醇浸润和活化,需一直保持湿润,根据Western进行到的具体步骤可放置于western转膜液或洗涤液等适当溶液中,否则可能会产生难以封闭的异常背景。
5、本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
6、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
1.Huang D ,Li Y ,Han J , et al.Xbp1 promotes odontoblastic differentiation through modulating mitochondrial homeostasis.[J].FASEB journal : official publication of the Federation of American Societies for Experimental Biology,2024,38(7):e23600-e23600. (IF 4.4)
答:可能的原因有:
1、目的蛋白有多个修饰位点,本身可以呈现多条带,建议查阅文献或进行生物信息学分析,获得蛋白序列的修饰位点信息,通过去修饰确定蛋白实际大小;
2、样本处理过程中目的蛋白发生降解,建议加入蛋白酶抑制剂;样本处理时在冰上操作;
3、杂蛋白多,建议处理目的蛋白;
4、抗体特异性不强,建议使用特异性强的抗体;
5、抗体孵育时间过久,建议减少抗体孵育时间;
6、二抗与抗原有交叉反应,建议选择合适的封闭物;
7、二聚体或多聚体存在,建议增加蛋白质变性过程及强度;
8、底物显色与曝光时间过长,建议缩短显色及曝光的时间。
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