本产品是一种广谱、高效、稳定、低毒的抑菌剂和防腐剂,可用于一抗、二抗、封闭液、抗体稀释液、洗涤 液、生化缓冲液、水浴锅用水、清洗剂、化妆品等的抑菌防腐。本产品在一定浓度下能在较长时间内广谱抑 制细菌、真菌等微生物的生长,并极少产生耐药性。本产品的主要活性成分是 5-氯-2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮 (CMIT)和 2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮(MIT)的 3:1 混合物,这两种成分可以抑制微生物生长并促使微生物死亡。其 原理是,CMIT/MIT 与细胞膜接触后,可立即渗透到细胞膜内并抑制细胞代谢的关键环节三羧酸循环过程中 的α-酮戊二酸脱氢酶、琥珀酸脱氢酶和 NADH 脱氢酶的活性,同时,其它的一些重要的酶如丙酮酸脱氢酶、 乳酸脱氢酶、乙醇脱氢酶也可以被抑制,从而抑制细胞代谢及大分子的合成,引起细胞内能量水平迅速下 降,终由于能量体系的崩溃、细胞不能进行正常的合成代谢而生长抑制或死亡。细菌和真菌拥有全部或部 分三羧酸循环,因此本产品对细菌和真菌都适用,具有非常广谱的抗菌谱,而且本产品具有多个脱氢酶作用 位点,因此大大降低了因变异而产生的微生物的耐药性。 本产品与抗体及一些酶的兼容性好,适用于 Western blot、免疫组化、免疫荧光、ELISA 等生化和免疫检测试 剂的抑菌和防腐。本产品不影响辣根过氧化酶(HRP)、碱性磷酸酶(AP)等酶的活性,也不影响抗体的结合反 应,可完美替代传统的硫柳汞、叠氮化钠和庆大霉素等生物防腐剂。本产品对 HRP 催化的 ECL 类化学发光和 TMB 显色反应没有影响本产品在正常推荐浓度(0.05%)及超过推荐浓度 10 倍(0.5%)的情况下,都不会对 HRP 催化的 ECL 类化学发光和 TMB 显色反应产生影响。本产品高效、稳定、低毒、环保、起效时间快,适用 pH 范围广(pH2.5~8.5),在各种缓冲溶液如 Tris、TES 或 HEPES 等 pH7 左右的溶液中化学稳定性好;在推荐温度 下,未开封产品可以稳定保存三年以上;与水可以任意比混合,适用于在水性溶液中添加本产品,在水溶液 中的稳定性好,对试剂的颜色无干扰;本产品毒性远远低于硫柳汞和叠氮化钠,且有良好的生物降解能力, 不会对环境造成污染。
本产品的适用 pH 范围为 2.5-8.5,推荐使用浓度为 0.05-0.2% (或约 0.5~2ml/L)。具体用量取决于微生物物种、 pH 值、温度及保存期限等。 本产品实测在浓度为 0.01%时,就能完全抑制大肠杆菌和酵母的生长。考虑到加入本产品后会长时间存放, 产品本身在某些条件下可能发生降解以及不同微生物有不同的耐药性等,实际使用时本产品终浓度的推荐 范围为 0.05-0.10%。对于一些特别容易被微生物污染的溶液,添加量可以增加到 0.1-0.2%。
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答:如果能够排除下面的几个问题,那么问题多半出现在一抗和抗原制备上。
1、二抗的HRP 活性太强,将底物消耗光;
2、ECL底物中H2O2不稳定,失活;
3、ECL底物没覆盖到相应位置;
4、一抗选择不当;
5、二抗失活。
答:可能的原因有:
1、膜没有完全均匀湿透,建议 使用100% methanol浸透膜;
2、洗膜不充分,可以增加洗液体积和洗涤次数;
3、电极不平衡或者加样位置偏斜,可以调整电极和加样;
4、封闭物用量不足,可以提高封闭物浓度,孵育时保证封闭液完全浸没转印膜;
5、封闭物使用不当,比如检测生物素标记的蛋白时不可用脱脂奶粉封闭;
6、封闭时间不够,一般情况下室温37度封闭1小时以上或者4度封闭过夜;
7、抗体非特异性结合,可以降低抗体浓度,减少孵育时间;
8、一抗稀释度不适宜,可以对抗体进行滴度测试,选择适宜的抗体稀释度;
9、一抗孵育的温度偏高,建议4℃结合过夜;
10、抗体浓度过高或洗涤不够,建议降低抗体浓度,增加洗涤次数和时间;
11、化学显色底物过多,建议按说明书加入适量的显色底物。
答:可能的原因有:
1、胶凝的不均匀或聚合不好,建议灌胶前将溶液充分混匀;
2、某些样品盐浓度较高,建议除盐或将样品盐浓度调成一致;
3、缓冲液陈旧,成分改变,可以重配;
4、凝胶下面有气泡,电泳前要先将气泡赶走;
5、电泳时温度过高,可以降低电流或电压;
6、样品中含有不溶性颗粒,建议样品充分搅拌混匀。
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