答：可能的原因有：

1、膜没有完全均匀湿透,建议 使用100% methanol浸透膜；

2、洗膜不充分，可以增加洗液体积和洗涤次数；

3、电极不平衡或者加样位置偏斜，可以调整电极和加样；

4、封闭物用量不足，可以提高封闭物浓度，孵育时保证封闭液完全浸没转印膜；

5、封闭物使用不当，比如检测生物素标记的蛋白时不可用脱脂奶粉封闭；

6、封闭时间不够，一般情况下室温37度封闭1小时以上或者4度封闭过夜；

7、抗体非特异性结合，可以降低抗体浓度，减少孵育时间；

8、一抗稀释度不适宜，可以对抗体进行滴度测试，选择适宜的抗体稀释度；

9、一抗孵育的温度偏高，建议4℃结合过夜；

10、抗体浓度过高或洗涤不够，建议降低抗体浓度，增加洗涤次数和时间；

11、化学显色底物过多，建议按说明书加入适量的显色底物。