吐温-20 (Tween-20)是属于聚山梨醇酯家族的一种聚氧乙烯山梨糖醇酯，非离子型表面活性剂，易溶于水。琥珀色油状液体，具有特殊的臭气和微弱苦味。Tween-20 是一种广泛用于生物化学应用中的非离子去垢剂，常用作乳化剂、分散剂、增溶剂、稳定剂等。Tween-20 也可用于预提取细胞膜以去除外周蛋白，已被用作基于膜的免疫分析的封阻剂。
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答：可能的原因有：
1、胶浓度不对，不同浓度的胶跑出的蛋白条带的位置可能有所偏差，可以调整浓度；
2、抗体孵育不充分,建议增加抗体浓度，延长孵育时间；
3、酶失活，建议直接将酶和底物进行混合，如果不显色则说明酶失活了。选择在有效期内、有活性的酶联物；
4、目的蛋白存在翻译后修饰或剪切体，建议查询相关文献确定；
5、标本中不含靶蛋白或靶蛋白含量太低，建议设置阳性对照比对结果，增加标本上样量。
答：一般5×10^6就足够。
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