TMB显色液(组化或膜HRP显色用)(TMB Chromogen Solution, TMB Substrate Solution or TMB Solution for Immunohistochemistry or Blotting)是一种采用了新单一溶液TMB显色技术,通过辣根过氧化物酶(HRP)催化TMB显色,用于免疫组化、原位杂交或膜显色等的显色液。本显色液也可以用于原位检测细胞或组织内源性的过氧化物酶。
通常的TMB显色试剂由多个组份组成,必须在使用前进行配制,并且容易产生沉淀,使用相对不太方便,并且也容易导致结果不太稳定。本TMB显色液采用了新的TMB显色技术,把所有的相关试剂全部配制在一个溶液中,仅由单一溶液组成,简化了操作步骤,并且使检测结果更加稳定可靠。
TMB,即3,3′,5,5′-Tetramethylbenzidine,是辣根过氧化物酶的常用底物。在辣根过氧化物酶或其他适当过氧化物酶的催化下,TMB会产生可溶性蓝色产物。蓝色产物通常可以在370nm或620-650nm测定吸光度。
本产品适用于 ELISA 检测时,每个样品通常使用 0.1ml 显色液,每 100ml 本产品共可以检测约 1000 个样品。
TMB对人体有刺激性,请注意适当防护。
本产品为无色至微蓝色透明溶液,如果发现TMB辣根过氧化物酶显色液出现混浊或颜色变成较深的蓝色,应该停止使用。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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答:可能的原因有:
1、目的蛋白有多个修饰位点,本身可以呈现多条带,建议查阅文献或进行生物信息学分析,获得蛋白序列的修饰位点信息,通过去修饰确定蛋白实际大小;
2、样本处理过程中目的蛋白发生降解,建议加入蛋白酶抑制剂;样本处理时在冰上操作;
3、杂蛋白多,建议处理目的蛋白;
4、抗体特异性不强,建议使用特异性强的抗体;
5、抗体孵育时间过久,建议减少抗体孵育时间;
6、二抗与抗原有交叉反应,建议选择合适的封闭物;
7、二聚体或多聚体存在,建议增加蛋白质变性过程及强度;
8、底物显色与曝光时间过长,建议缩短显色及曝光的时间。
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