TMB显色终止液(450nm,ELISA)(TMB Chromogen Solution, TMB Substrate Solution or TMB Solution for Immunohistochemistry or Blotting)是一种采用了新单一溶液TMB显色技术,通过辣根过氧化物酶(HRP)催化TMB显色,用于ELISA等的显色液。本显色液也可以用于检测血液或血红蛋白等样品中的过氧化物酶含量。
加入本产品后,TMB显色反应会被终止,并且原来的蓝色溶液会并转变成在450nm处有较强光吸收的黄色溶液,终在450nm测定吸光度并且可以使检测灵敏度比检测蓝色吸光度提高1倍左右。由于辣根过氧化物酶与TMB的反应在一定时间内能持续进行,若不及时终止反应,可能会由于反应达到平台期等而影响实验结果。TMB显色终止液根据吸光度的检测分为两种,一种是在450nm进行检测,一种是在620-650nm进行检测。本TMB显色终止液加入后溶液颜色从蓝色变为黄色,并在450nm测定吸光度,本产品终止反应后在1小时内吸光度保持稳定。
本产品相对比较安全。2M硫酸是常用的TMB显示终止液,但由于其腐蚀性极强而有较大的安全隐患。本产品不含硫酸,使用了相对更加安全的适当中强酸,可以有效避免硫酸的强腐蚀性可能对人体造成的伤害。需要注意的是本产品作为中强酸,虽然腐蚀性比硫酸弱很多,但还是有一定的腐蚀性,需要注意适当防护。
1. 对于ELISA等实验中TMB显色反应的终止:
a. 参考ELISA试剂盒的实验步骤,在与辣根过氧化物酶标记的抗体孵育后,用适当洗涤液洗涤3-5次,每次3-5分钟。
b. 洗涤完毕后,去除洗涤液,加入100µl TMB显色液。
c. 室温避光孵育3-30分钟或更长时间,直至显色至预期深浅。
d. 加入100µl TMB显色终止液(450nm, ELISA),随后在450nm测定吸光度。
2. 对于在96孔板内进行的其它适当检测 (如检测组织或细胞样品内源性的过氧化物酶):
a. 在96孔板内每孔加入10-20µl样品。
b. 加入100µl TMB显色液。
c. 室温避光孵育3-30分钟或更长时间,直至显色至预期深浅。
d. 加入100µl TMB显色终止液(450nm, ELISA),随后在450nm测定吸光度。
1.本产品适用于ELISA等实验时溶液中TMB显色反应的终止,不适用于膜或组化组化反应TMB显色的终止。
2.加入TMB显色液或者TMB显色终止液后,如果有沉淀生成,说明样品中目的蛋白的含量过高,建议适当稀释后再进行测试。
3.本产品有腐蚀性,操作时请小心,并注意有效防护以避免直接接触人体或腐蚀其它物品。
4.本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
5.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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答:可能的原因有:
1、目的蛋白有多个修饰位点,本身可以呈现多条带,建议查阅文献或进行生物信息学分析,获得蛋白序列的修饰位点信息,通过去修饰确定蛋白实际大小;
2、样本处理过程中目的蛋白发生降解,建议加入蛋白酶抑制剂;样本处理时在冰上操作;
3、杂蛋白多,建议处理目的蛋白;
4、抗体特异性不强,建议使用特异性强的抗体;
5、抗体孵育时间过久,建议减少抗体孵育时间;
6、二抗与抗原有交叉反应,建议选择合适的封闭物;
7、二聚体或多聚体存在,建议增加蛋白质变性过程及强度;
8、底物显色与曝光时间过长,建议缩短显色及曝光的时间。
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