对木质化较高的根、茎等植物组织进行石蜡切片时,组织较硬脆,需要对组织进行相应的软化后,方能得到组织薄片。传统软化剂多以氢氟酸或甘油的水溶液为软化剂,甘油溶液软化时间较长,一般需3周以上。氢氟酸腐蚀性强、毒性大,二者对组织的软化程度和切片效果多无法准确掌控,不利于广泛应用。本软化液针对现有技术的不足,提供一种新植物组织软化剂及使用方法,本软化剂挥发性小,无刺激性气味,毒性小,软化时间短,软化时间较甘油软化液缩短两周,软化时间可根据组织大小精确把握,软化后的组织适于石蜡切片。
1.将植物组织离体后经过FAA固定液固定48h以上后,将固定液移除。
2.加入软化剂进行软化,软化剂的加入量和软化时间控制如下:
①软化剂的加入量以将组织完全浸泡为准。
②软化时间以4mm直径葡萄根为基准软化7天,组织直径每增加1mm,软化时间增加1天。
3.软化后的组织在进行石蜡切片。
1.为了您的安全和健康,请采取必要的防范措施。操作时应戴一次性手套,穿实验服,避免与皮肤接触。
2.本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
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答:可能的原因有:
1、胶浓度不对,不同浓度的胶跑出的蛋白条带的位置可能有所偏差,可以调整浓度;
2、抗体孵育不充分,建议增加抗体浓度,延长孵育时间;
3、酶失活,建议直接将酶和底物进行混合,如果不显色则说明酶失活了。选择在有效期内、有活性的酶联物;
4、目的蛋白存在翻译后修饰或剪切体,建议查询相关文献确定;
5、标本中不含靶蛋白或靶蛋白含量太低,建议设置阳性对照比对结果,增加标本上样量。
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