Propidium Iodide简称PI，中文名为碘化丙啶。分子式为C27H34I2N4，分子量为668.40，纯度>95%。进口分装，常用于细胞凋亡(apoptosis)或细胞坏死(necrosis)的检测，常用于流式细胞仪分析。

1. 贴壁细胞复染步骤（荧光显微镜检测）

1） 样本准备：根据自身样本选择合适步骤固定细胞。PI染色一般在其它染色完成后再进行。PI复染要求细胞经透化处理。

2） RNase酶处理：若样本使用多聚甲醛，甲醛或者戊二醛固定，则需要进行RNase处理。若样本用甲醇/醋酸或者丙酮固定，通常不需要此步操作。a，于2×SSC (0.3 M NaCl, 0.03 M sodium citrate, pH 7.0)溶液平衡样本；b，将本品置于含有100 µg/mL DNase-free RNase的2×SSC溶液中37°C孵育20 min；c，用2×SSC溶液清洗样本3次，每次1 min。

3） 复染：a，于2×SSC (0.3 M NaCl, 0.03 M sodium citrate, pH 7.0)溶液平衡样本；b，直接用2×SSC稀释1 mg/mL(1.5 mM)PI储存液 1:3000，得到500 nM的PI工作液。通常添加300 µL染液足够用于一个盖玻片细胞制片。染色1-5 min。c，2×SSC清洗几次，流尽多余液体，加入抗淬灭剂封片(Yeasen,Cat#36308ES08)。d，选择荧光显微镜的合适滤片进行观察。

2. 悬浮细胞复染步骤（流式细胞仪检测）

1）样本准备：根据自身样本选择合适的步骤固定细胞。或者使用如下的步骤：

a. 收集细胞，密度约2×105~1×106。离心后吸除上清，轻弹管壁就剩下的液体重悬细胞。加入1 mL常温存放的PBS；

b. 将所有的重悬细胞转移到4 mL于-20ºC预冷的无水乙醇，在高速涡旋混匀的同时一边用枪缓慢的添加细胞悬液到乙醇内。于-20ºC乙醇中固定5-15 min。

c. 离心收集细胞，除去乙醇。轻弹管壁以弹松细胞后，加入5ml室温的PBS。允许细胞水化15 min；

2）复染

a. 用染色液（100 mM Tris, pH 7.4, 150 mM NaCl, 1 mM CaCl2 , 0.5 mM MgCl2 , 0.1% Nonidet P-40）稀释1 mg/mL（1.5 mM）PI储存液 1:500，得到3 µM的PI工作液。1 mL的PI染色液足够用于每个细胞样本的检测。

b. 样本制备的后一步后离心收集细胞，去除上清，用手轻弹管壁以弹松细胞后，加入1 mL的PI染色工作液。室温孵育15 min后，流式细胞仪进行细胞分析。若用显微镜观察，则需要离心样本，去除上清并重悬细胞在新鲜的缓冲液中。吸取1滴悬液到载玻片上，盖上盖玻片后观察。

3. 染色质FISH复染步骤

1）样本准备：根据标准步骤制备样本。复染之前的后一步用去离子水清洗样本以去除玻片上残留的缓冲液。室温晾干。此步骤有助于减少非特异性的背景染色。

2）复染

a. 工作液的配制：用PBS缓冲液直接稀释1 mg/mL(1.5 mM)的PI储存液1:1000，得到1.5 µM的PI染色工作液。滴加300 µL的工作液直接到样本。有必要的话，工作液内加入新鲜制备的RNase A（终浓度：10 µg/mL）。可使用塑料盖玻片均匀分布染液在载玻片上。室温避光条件下孵育样本30 min；如果加入RNase则37ºC孵育。

b. 去除盖玻片，用PBS或去离子水清洗以除去没有结合的染料；

c. 用吸水纸围绕样本周围吸取残留液体，盖上玻璃盖玻片用石蜡或指甲油封住盖玻片边缘。也可用抗荧光淬灭剂进行封片。

d. 选择荧光显微镜的合适滤片进行观察。

1. 碘化丙啶PI溶液是已知的诱变剂，因此PI溶液在丢弃之前需要先经过活性炭处理。

2. 本产品对人体有刺激性，操作时请小心，并注意适当防护以避免直接接触人体或吸入体内。

3. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放

于普通住宅内。

4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。