髓鞘(myeLin sheath)是包裹在神经轴突外面的管状鞘结构,呈节段性,具有绝缘作用并提高神经冲动的传导速度,在中枢和外周神经系统中起保护轴突作用。髓鞘由鞘磷脂构成,其成分主要是类脂质和蛋白质。髓鞘染色具有一定的病理诊断意义,如果髓鞘发生病变,在染色时髓鞘数量显著减少或消失,或髓鞘形态不规则。
本产品髓鞘染液主要成分为:髓鞘染液A为0.1%固蓝((LuxoL fast bLue),染液B为碳酸锂分化液,染液C是70%乙醇。经本产品染色后,神经髓鞘呈蓝色,背景淡蓝色或近乎无色。
1. 石蜡切片脱蜡至水。
2. 将髓鞘染液A在65℃烘箱提前预热30min。组织切片进入预热的髓鞘染液A中65℃染色4h(加盖防止液体蒸发)。
3. 室温自然冷却后取出切片,自来水洗至玻片流水呈无色。
4. 切片迅速浸入髓鞘染液B中快速分化5s,然后取出切片立即置于髓鞘染液 C 中快速分化10s,即使切片交替浸入髓鞘染液B和髓鞘染液C中进行分化,及时镜检直至髓鞘呈蓝色背景近无色,然后水洗终止分化。
5. 切片经3次无水乙醇脱水,每次5min,再经二甲苯透明5min,然后用中性树胶封片。
1. 髓鞘染液A预热很重要,染液温度会对组织着色的强弱有一定影响。
2. 切片经染液A染色水洗后,需要尽快分化,避免组织干片。
3. 操作时请穿实验服,并佩戴一次性手套。
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答:可能的原因有:
1、目的蛋白有多个修饰位点,本身可以呈现多条带,建议查阅文献或进行生物信息学分析,获得蛋白序列的修饰位点信息,通过去修饰确定蛋白实际大小;
2、样本处理过程中目的蛋白发生降解,建议加入蛋白酶抑制剂;样本处理时在冰上操作;
3、杂蛋白多,建议处理目的蛋白;
4、抗体特异性不强,建议使用特异性强的抗体;
5、抗体孵育时间过久,建议减少抗体孵育时间;
6、二抗与抗原有交叉反应,建议选择合适的封闭物;
7、二聚体或多聚体存在,建议增加蛋白质变性过程及强度;
8、底物显色与曝光时间过长,建议缩短显色及曝光的时间。
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