-
IHC实验中无染色
答：可能的原因有：
1、IHC实验一抗和二抗不兼容；
2、没有足够的一抗与目的蛋白结合；
3、抗体可能不适用于IHC，因为其可能无法识别蛋白的天然(3D)形式；
4、一抗/二抗/信号放大试剂盒可能因储存不当、稀释不当或多次反复冻融而失去活性；
5、该蛋白不存在于目标组织中；
6、目的蛋白在组织中含量并不丰富；
7、二抗未避光保存（进行荧光检测时）；
8、脱蜡可能不充分；
9、固定步骤可能会改变抗体识别的抗原表位；
10、抗体不能穿透蛋白所定位的细胞核（核蛋白）；
11、PBS缓冲液被细菌污染，细菌会破坏目的蛋白上的磷酸基团（磷酸化蛋白）；
12、抗原修复不全，对于甲醛固定的组织必须用充分抗原修复来打开抗原表位，以利于与抗体结合。
-
IHC实验中非特异染色
1、一抗/二抗浓度可能过高；
2、内源性过氧化物酶具有活性；
3、使用与染色组织相同种属来源的一抗（例如在小鼠组织上使用小鼠一抗）。应用二抗时，由于二抗是靶向组织种属的，与组织中的免疫球蛋白或蛋白的Fc片段结合；
4、切片/细胞已干燥；
5、一抗用多克隆抗体易出现非特异性着色；
6、非特异性组分与抗体结合。
