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IHC实验中高背景
1、没有对非特异性结合进行封闭或封闭不充分;
2、一抗浓度可能过高;
3、孵育温度可能过高;
4、二抗可能存在非特异性结合;
5、组织洗涤不充分;仍然存在固定剂;
6、内源性过氧化物酶具有活性;
7、固定步骤导致自发荧光(如果使用荧光检测);
8、组织内自发荧光(如果使用荧光检测);
9、信号放大过多(间接检测技术);
10、底物过多(酶检测);
11、色原与组织样品中存在的PBS反应(酶检测)。
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IHC实验中组织形态不清晰或受损
1、抗原修复方法可能过于苛刻;
2、组织可能未充分固定;
3、组织切片从载玻片上脱落(冰冻切片);
4、组织切片撕裂或折叠,或切片下方可见气泡;
5、组织形态难以分辨;
6、组织自溶。