细菌基因组DNA小量提取试剂盒(离心柱型)
货号:PM0301/PM0302
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价格:
300.00
规格:
50T
100T
货期:
3天
试剂盒常温保存,Proteinase K溶液-20℃保存,12个月有效。
Details
产品详情
  • 产品简介

    本产品适用于从细菌(包括革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌)中提取基因组DNA,采用了高效的细胞裂解缓冲液,利用高载量的硅基提取柱,可快速实现基因组DNA的提取,具有简单易操作、耗时短以及纯度和得率高等优点。
    本试剂盒可在60min内完成提取,提取的基因组DNA可用于下游的酶切、PCR扩增等。

  • 产品内容

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  • 使用方法

    准备工作:将溶菌酶(Lysozyme)粉末(自备)溶解于Tris-HCl缓冲液(10mM,pH8.0),配制成10mg/ml的溶解酶溶液。首次使用时,在Wash Buffer中加入相应体积的乙醇,将Proteinase K溶液解冻后分装保存,以避免反复冻融。
    1. 取1-5ml过夜培养菌液样品(约 10^9个细菌)于1.5ml离心管中,8000rpm离心5min,完全吸弃上清液。
    2. 加入200μl Tris-HCl(10 mM, pH 8.0)(自备),涡旋充分重悬菌体。
    3. 加入5μl配制好的溶菌酶溶液(10 mg/ml),37℃孵育15min。
    可选步骤:如需去除RNA,可加入4μl RNase A溶液(100mg/ml)(自备),移液器吹打混匀后室温静置5min。
    4. 加入200μl Lysis-Binding Buffer和40μl Proteinase K,用移液器吹打混匀后在70℃水浴中孵育10min。
    5. 加入100μl异丙醇,涡旋混匀。
    6. 将提取柱置于收集管上,将样品加入到提取柱中,12000rpm离心1min,弃去流出液。
    7. 将提取柱重新置于收集管上,加入500μl Buffer IR,12000rpm离心1min,弃去流出液。
    8. 将提取柱重新置于收集管上,加入500μl Wash Buffer,12000rpm离心1min,弃去流出液。
    9. 重复步骤 8。
    10. 将提取柱再次置于收集管上,12000rpm再次离心1min。
    11. 将提取柱置于一个新的1.5ml离心管,加入60-100μl Buffer EB或纯水,12000rpm离心1min。(使用55℃预热的Buffer EB或纯水可提高洗脱效率)

  • 注意事项

    1、对于大肠杆菌,OD600为1时,相当于3~4x10^8cells/ml。不同细菌特定OD值对应的细胞数量有所不同。
    2、产品(除Proteinase K溶液外)可在15-25℃条件下保存12个月以上。Proteinase K溶液在-20℃条件下可稳定保存12月以上,但是反复冻融可能会影响活性,建议次解冻后分装保存。
    3、次使用时请根据试剂瓶上说明在Wash Buffer中加入乙醇。
    4、Lysis-Binding Buffer、Buffer IR含有高浓度盐分,在低温下或长期保存会出现结晶,属正常现象。如出现混浊或结晶,可在37℃孵育5-10 min,即可恢复澄清,不影响使用。
    5、Lysis-Binding Buffer、Buffer IR、Wash Buffer含有去垢剂以及乙醇等成分,请避免与皮肤直接接触。
    6、洗脱时,将Buffer EB或水预热至 55℃可提高洗脱效率。
    7、请自备溶菌酶Lysozyme。
    8、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
    9、本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

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Product Q&A FAQ
产品问答FAQ
  • Western Blot(WB)实验中为啥条带形状不好看?

    答:可能的原因有:

    1、胶凝的不均匀或聚合不好,建议灌胶前将溶液充分混匀;

    2、某些样品盐浓度较高,建议除盐或将样品盐浓度调成一致;

    3、缓冲液陈旧,成分改变,可以重配;

    4、凝胶下面有气泡,电泳前要先将气泡赶走;

    5、电泳时温度过高,可以降低电流或电压;

    6、样品中含有不溶性颗粒,建议样品充分搅拌混匀。


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