本产品适用于从动物组织(如脏器、鼠尾等)中提取基因组DNA,采用了高效的组织裂解缓冲液,利用高载量的硅基提取柱,可实现基因组DNA的快速提取,具有简单易操作、耗时短以及纯度和得率高等优点。
本试剂盒提取的基因组 DNA 可用于下游的酶切、PCR 扩增等。
准备工作:首次使用时,在Wash Buffer中加入相应体积的乙醇。将ProteinaseK溶液解冻后分装保存,以避免反复冻融。
1. 样品采集:因不同组织中核酸含量有差异,建议按照下表采集组织样品。
2. 将上述样品加入到干净的1.5ml 离心管中,用干净的剪刀将组织剪碎(如需提高提取产量,可将组织置于研钵中加入液氮充分研磨,或使用匀浆机充分研磨),加入200μl Tissue Lysis Buffer和40μl Proteinase K,混匀后在55℃水浴中孵育或直至组织被完全裂解(裂解时间取决于样品类型,一般鼠尾样品需要3-5小时,甚至消化过夜。脏器裂解时间在1-3小时左右)。
3. 用移液枪头或1ml注射器(不带针头)反复吸吹样品3-5次,使组织充分裂解。
4. 加入200μl Lysis-Binding Buffer,充分混匀后在70℃孵育10min。
5. 加入100μl异丙醇,充分涡旋混匀。
6. 12000rpm离心5min。
7. 将提取柱置于收集管上,吸取上清液加入到提取柱中,12000rpm离心1min,弃去流出液。
8. 将提取柱重新置于收集管上,加入500μl Buffer IR,12000rpm离心1min,弃去流出液。
9. 将提取柱重新置于收集管上,加入500μl Wash Buffer,12000rpm离心1min,弃去流出液。
10. 重复步骤9。
11. 将提取柱再次置于收集管上,12000rpm离心1min。
12. 将提取柱置于一个新的1.5ml离心管,加入60-100μl Buffer EB或纯水,12000rpm离心1min。(使用55℃预热的Buffer EB或纯水可提高洗脱效率)
1、产品(除Proteinase K溶液外)可在15-25℃条件下保存12个月以上。Proteinase K溶液在-20℃条件下可稳定保存12月以上,但是反复冻融可能会影响活性,建议次解冻后分装保存。
2、次使用时请根据试剂瓶上说明在Wash Buffer中加入乙醇。
3、Lysis-Binding Buffer、Buffer IR含有高浓度盐分,在低温下或长期保存会出现结晶,属正常现象。如出现混浊或结晶,可在37℃孵育5-10min,即可恢复澄清,不影响使用。
4、Lysis-Binding Buffer、Buffer IR、Wash Buffer含有去垢剂以及乙醇等成分,请避免与皮肤直接接触。
5、洗脱时,将Buffer EB或水预热至55℃可提高洗脱效率。
6、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
7、本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
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答:如果能够排除下面的几个问题,那么问题多半出现在一抗和抗原制备上。
1、二抗的HRP 活性太强,将底物消耗光;
2、ECL底物中H2O2不稳定,失活;
3、ECL底物没覆盖到相应位置;
4、一抗选择不当;
5、二抗失活。
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