DiR染料是亲脂性的近红外花菁荧光染料，可以用来染细胞膜和其它脂溶性生物结构。18个碳的长链插入细胞膜中从而对细胞进行染色, 而细胞间的染料转移可以忽略不计。DiR的发射的是近红外荧光可以穿透细胞和组织，在活体成像中用来示踪。
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1、没有对非特异性结合进行封闭或封闭不充分；
2、一抗浓度可能过高；
3、孵育温度可能过高；
4、二抗可能存在非特异性结合；
5、组织洗涤不充分；仍然存在固定剂；
6、内源性过氧化物酶具有活性；
7、固定步骤导致自发荧光（如果使用荧光检测）；
8、组织内自发荧光（如果使用荧光检测）；
9、信号放大过多（间接检测技术）；
10、底物过多（酶检测）；
11、色原与组织样品中存在的PBS反应（酶检测）。
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