钙荧光探针Fluo-4, AM,橙红色粉末; 纯度:≥90%(HPLC)
钙指示剂是结合 Ca2+ 后显示荧光增强的分子。Fluo-3 应用在流式细胞分析上,如涉及笼状螯合剂光活化、第二信使和神经递质的实验以及基于细胞的药理学筛选,用于 Ca2+ 信号转导的空间动力学成像。Fluo-4 是 fluo-3 的类似物,其中两个氯取代基被氟取代,导致在 488 nm 波长处的荧光激发增强,因此荧光信号水平更高。将溶解后的指示剂直接加入含有培养细胞的培养皿中,即可向细胞加载 AM 酯形式的这类钙离子指示剂。这些指示剂可用于荧光和共聚焦显微镜、流式细胞分析以及微孔板筛选应用。
Fluo-4是一种将Fluo-3结构中的Cl替换成F的钙荧光探针。由于将Cl替换成了电子吸引力更强的F,它的大激发波长会向短波长处偏离10 nm左右。这个波长更接近于氩激光器的波长,所以用氩激光器激发时,Fluo-4的荧光强度比Fluo-3强一倍。Fluo-4, AM穿透细胞膜进入细胞后被细胞内的酯酶剪切形成Fluo-4,从而被滞留在细胞内,Fluo-4若以游离配体形式存在时几乎是非荧光性的,但是当它与细胞内钙离子结合后可以产生较强的荧光,大激发波长为494nm,大发射波长为516nm。可以使用激光共聚焦显微镜或流式细胞仪检测细胞内钙离子浓度的变化。
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答:可能的原因包括培养基质量、血清质量、温度、pH值、气体比例等。
解决方法有:
1. 使用高质量的培养基和血清,确保其无菌、无支原体污染,并保证在保质期内使用;
2. 培养箱温度和气体比例要保持稳定,定期校准;
3. 每天检查并记录细胞培养的环境参数,如温度、pH值、气体比例等,以便及时发现问题;
4. 定期更换培养基,保持细胞营养充足;
5. 对于生长缓慢的细胞株,可以尝试进行克隆筛选或更换培养基。
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