Fluo-2 早是由 Roger Tsien 博士发明的钙离子指示剂 Fluo 系列之一，目前，Fluo-3 和Fluo-4 已成熟商品化。然而，Fluo-2 在细胞内比 Fluo-4 要更明亮，主要可能是由于大部分细胞对 FLuo-2 的加载能力要高于 FLuo-4。

Fluo-3 成像涉及到钙离子信号通路的多个方面，Fluo-3 经常应用在流式细胞术上，如螯合剂光活化、第二信使、神经递质以及细胞水平的药理筛选。Fluo-3 在这些应用里之所以能大量运用主要是由于其几个重要特性：Fluo-3 可以被氩离子激光器 488nm 激发，并在与 Ca²⁺结合后，发射荧光很明亮的荧光信号。

Fluo-3 AM 是一种可以穿透细胞膜的荧光染料。Fluo-3 AM 的荧光非常弱，其荧光不会随钙离子浓度升高而增强。Fluo-3 AM 进入细胞后可以被细胞内的酯酶剪切形成 Fluo-3，从而被滞留在细胞内。Fluo-3 可以和钙离子结合，结合钙离子后可以产生较强的荧光，大激发波长为 506nm，大发射波长为 526nm。实际检测时推荐使用的激发波长为 488nm 左右，发射波长为 525-530nm。