从克隆的但是表型各异的MC3T3-E1细胞系中分离出一系列亚克隆。从含抗坏血酸培养基生长的成骨细胞中选择高或低成骨细胞分化、矿化的亚克隆。MC3T3亚克隆4(ATCC CRL-2593)和MC3T3亚克隆14(ATCC CRL-2594)在抗坏血酸和3到4mM无机磷酸盐中生长表现出高水平的成骨细胞分化。它们10天后形成一个矿化良好的细胞外基质(ECM).MC3T3亚克隆24(ATCC CRL-2595)和MC3T3亚克隆30(ATOC CRL-2596)在抗坏血酸中生长表现出很差的成骨细胞分化。不形成ECM，可以作为亚克隆4和14的阴性对照。矿化的亚克隆选择的表达作为成骨细胞标记的mRNA，及唾液酸糖蛋白(BSP)，骨钙素(OCN)，和甲状旁腺激素/甲状旁腺激素相关蛋白受体的mRNA。高或者低的分化潜能的亚克隆在培养中生产出相似数量的胶原质，表达可比较的基本水平的mRNA编码0sf2/Cbfal，一种成骨细胞相关转录因子。植入免疫缺陷小鼠以后，高分化性的亚克隆形成与骨类似的形成小骨的编织骨，低分化细胞只是产生纤维组织。这些细胞系是研究体外成骨细胞分化的好模型，尤其是ECM信号。它们和原代培养颅顶成骨细胞的行为类似。

1)来源:小鼠，头骨，颅骨

2)形态:成纤维细胞样，贴壁生长

3) 含量:>1x10°细胞数

4)规格:T25 瓶或者 1mL冻存管包装

5)用途:仅供科研使用。

干冰运输及复苏好存活细胞:

(1)1mL冻存管包装干冰运输，收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。

(2)T25瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。

1)收到细胞后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h,若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。

2)请在4或5X显微镜下确认细胞状态，同时给刚收到的细胞拍照(10x，20x)各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后时收到时细胞状态的依据。

3)贴壁细胞:T25瓶置于37℃培养箱中约2-3h，显微镜下观察细胞的情况，若细胞密度在70%-80%左右，可进行传代，首次传代建议1:2(也可根据情况调整)，若细胞生长不足70%，建议消化处理后，转移到新的T25培养瓶(1:1)继续培养。

4)半贴细胞或贴壁不牢(悬浮)细胞:T25瓶置于37℃培养箱中约2-3h,显微镜下观察细胞的情况，若细胞密度在60%以下，客户需收集T25瓶中的悬浮细胞离心后用完全培养基重悬后打回到原培养瓶中继续培养，若细胞生长70%-90%对细胞进行传代，传代时需要收集培养基中悬浮的细胞离心后回收。

5)备注:运输用的培养基(灌注培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议T25培养瓶1:2传代。

1)准备培养基:MEMa+10%FBS+1%P/S.

2)培养条件:气相:空气，95%;二氧化碳，5%。温度:37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

3)冻存液:基础培养基+10%DMSO+20%FBS，现用现配