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细胞培养中细胞生长缓慢或不生长的可能原因及解决方法
答:可能的原因包括培养基质量、血清质量、温度、pH值、气体比例等。
解决方法有:
1. 使用高质量的培养基和血清,确保其无菌、无支原体污染,并保证在保质期内使用;
2. 培养箱温度和气体比例要保持稳定,定期校准;
3. 每天检查并记录细胞培养的环境参数,如温度、pH值、气体比例等,以便及时发现问题;
4. 定期更换培养基,保持细胞营养充足;
5. 对于生长缓慢的细胞株,可以尝试进行克隆筛选或更换培养基。
本胰酶细胞消化液含 0.25%胰酶和 0.02%EDTA,不含 Ca 2+和 Mg 2+。该消化液已用 0.22um 滤膜过滤除菌,可 以直接用于培养细胞的消化,或者一些组织的消化。本胰酶细胞消化液具有方便快速的特点,通常室温消化 1 分钟左右就可以消化下大多数贴壁细胞。
1. 贴壁细胞的消化: a)吸去培养液,用无菌的 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次,以去除残余的血清。
b)加入少量胰酶细胞消化液,略盖过细胞即可,室温放置 30 秒至 2 分钟。不同的细胞消化时间有所不同。
c)显微镜下观察,细胞明显收缩,并且肉眼观察培养器 Mm 底部发现细胞的形态发生明显的变化;或者用枪 吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来。此时吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的完全细胞培养液,吹打下 细胞,即可直接用于后续实验。
d)如果发现消化不足,则加入胰酶细胞消化液重新消化。
e)如果发现细胞消化时间过长,未及吹打细胞,细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落,直接用胰酶细胞 培养液把细胞全部吹打下来。100-2000g 离心 1 分钟,沉淀细胞,尽量去除胰酶细胞消化液后,加入含血清的 完全培养液重新悬浮细胞,即可用于后续实验。
2. 组织的消化: 不同的组织需要消化的时间相差很大,通常以消化后可以充分打散组织为宜。
1. 在使用胰酶细胞消化液的过程中要特别注意避免消化液被细菌污染。
2. 胰酶细胞消化液消化细胞时间不宜过长,否则细胞铺板后生长状况会较差。
3. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴-次性手套操作。
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答:可能的原因包括培养基质量、血清质量、温度、pH值、气体比例等。
解决方法有:
1. 使用高质量的培养基和血清,确保其无菌、无支原体污染,并保证在保质期内使用;
2. 培养箱温度和气体比例要保持稳定,定期校准;
3. 每天检查并记录细胞培养的环境参数,如温度、pH值、气体比例等,以便及时发现问题;
4. 定期更换培养基,保持细胞营养充足;
5. 对于生长缓慢的细胞株,可以尝试进行克隆筛选或更换培养基。
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