绝大多数正常细胞的分裂能力是有限的,在不能分裂后就进入衰老状态,此过程即为细胞衰老(cell senescence)。正常细胞经过有限次数的分裂后停止分裂,出现不可逆的生长停滞,此时细胞仍然是存活的,但是细胞形态和生理代谢活性发生明显变化,通常表现为细胞体积变大,与衰老相关的β-半乳糖苷酶为活化状态。β-半乳糖苷酶是细胞溶酶体内的水解酶,通常在pH 4.0时表现活性,但在衰老细胞内该酶在pH 6.0条件下表现活性,这被认为是细胞衰老的生物标记。本试剂盒是一种基于衰老时衰老相关β-半乳糖苷酶活性水平上调而对衰老细胞或组织进行染色检测的试剂盒。其原理是以 X-Gal为底物,在 pH 6.0 条件下,衰老特异性的β-半乳糖苷酶催化该底物生成深蓝色产物,表现为细胞胞质有蓝色沉积物,可以在光学显微镜下进行观察。本试剂盒适用于培养细胞和组织切片的衰老检测,但仅染色衰老细胞,不会染色衰老前的细胞(presenescent cells)、静止期细胞(quiescent cells)、永生细胞(immortal cells)或肿瘤细胞。按照每个样品染色液用量为1mL计算,本试剂盒可完成100个样品的染色。
显微镜、无 CO2的37℃培养箱
6孔板、移液器及枪头、封口膜
聚丙烯管(15或50mL)、制备试剂和缓冲溶液的各种玻璃器皿
去离子水、甘油、PBS缓冲液(推荐PMK0031)
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答:可能的原因包括培养基质量、血清质量、温度、pH值、气体比例等。
解决方法有:
1. 使用高质量的培养基和血清,确保其无菌、无支原体污染,并保证在保质期内使用;
2. 培养箱温度和气体比例要保持稳定,定期校准;
3. 每天检查并记录细胞培养的环境参数,如温度、pH值、气体比例等,以便及时发现问题;
4. 定期更换培养基,保持细胞营养充足;
5. 对于生长缓慢的细胞株,可以尝试进行克隆筛选或更换培养基。
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