细胞在发生凋亡时,会激活一些DNA内切酶,这些内切酶会切断核小体间的基因组DNA,造成细胞染色体 DNA的降解。这种降解非常特异并有规律,所产生不同长度的 DNA 片段约为180bp-200bp的整数倍,表现为琼脂糖凝胶电泳中呈现特异的梯状Ladder图谱。细胞凋亡时抽提DNA进行电泳检测,可以发现180-200bp的DNA ladder。基因组DNA断裂时,暴露的3'-OH可以在末端脱氧核苷酸转移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase,TdT)的催化下加上绿色荧光探针(SF488)标记的dUTP(fluorescein-dUTP),这就是TUNEL(TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling)法检测细胞凋亡的原理。488-dUTP 标记的DNA可以用荧光显微镜直接观察或者用流式细胞仪定量。TUNEL 法可以选择性的检测凋亡细胞,而非坏死细胞或因辐照和药物治疗而造成DNA链断裂的细胞。TUNEL实验中,TdT酶催化dUTP掺入断裂的DNA链的3´-OH 末端。抗原标记dUTP(如digoxin-dUTP、生物素-dUTP),因为它可以直接进行原位检测,是一种更快速、直接的检测手段。
PBS 缓冲液(pH~7.4);4%多聚甲醛;牛血清白蛋白 (BSA) 或正常的羊、牛血清;70%乙醇(自选);脱蜡溶剂(石蜡切片样本)
1) 荧光染料均存在淬灭问题,保存和使用过程中请尽量注意避光,以减缓荧光淬灭。
2) TUNEL Equilibration Buffer 和 TUNEL Reaction Buffer 中含有 Sodium cacodylate trihydrate 和Cobaltous chloride,使用时请佩戴口罩、手套,接触皮肤后, 请立即有大量水冲洗,废液请按有毒物质处理。
3) 本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
4) 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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答:细胞形态异常可能是由于支原体污染、有毒物质释放、营养不足等原因引起的。
解决方法有:
1、定期进行支原体检测,确保细胞无支原体污染;
2、检查培养基和血清的质量,避免使用过期或劣质的试剂;
3、观察细胞形态,发现异常及时采取措施,如更换培养基或使用相应的药物处理;
4、对于有毒物质释放引起的形态异常,可以尝试降低细胞密度或更换培养基。
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