Calcein AM是在Calcein (钙黄绿素)的基础上增加了乙酰氧基甲酯(AM)基团,加强了疏水性,因此能够很容易穿透活细胞膜,进入细胞内,从而标记细胞。Calcein AM本身并无荧光,进入细胞后被细胞中内源性酯酶水解生成具有强负电荷的不能通透细胞膜的极性分子钙黄绿素(Calcein),从而被滞留在细胞内,而Calcein可发出强绿色荧光。由于死细胞缺乏酯酶,Calcein AM进入细胞后仅活细胞会被染色为绿色荧光,所以可对活细胞进行定量荧光检测。与其它同类探针相比,由于Calcein AM的细胞毒性非常低,几乎不会影响细胞功能如细胞增殖或淋巴细胞的趋化性等,而且对pH值敏感性低,所以Calcein AM是目前活细胞荧光染色的理想探针之一。近年来Calcein AM也被广泛用于细胞活性、细胞毒性或细胞增殖的检测。Calcein AM细胞活性检测试剂盒是一种通过Calcein-AM荧光探针标记活细胞从而简单、快速、灵敏、准确地用于细胞活性、细胞毒性或细胞增殖检测的试剂盒。本试剂盒由于能用于活细胞的精确定量,也被称为细胞荧光计数试剂盒(Cell Fluorescence Counting Kit),简称Cell Fluorescence Counting Kit-F、CCK-F或CCKF。本试剂盒通常推荐使用荧光酶标仪进行定量检测,也可以使用流式细胞仪进行定量检测。如果有必要,也可以使用荧光显微镜或共聚焦显微镜进行细胞的荧光检测。
荧光酶标仪或流式细胞仪或荧光显微镜、离心机
细胞培养板、可调节式移液枪及枪头
去离子水、PBS
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答:可能的原因包括培养基质量、血清质量、温度、pH值、气体比例等。
解决方法有:
1. 使用高质量的培养基和血清,确保其无菌、无支原体污染,并保证在保质期内使用;
2. 培养箱温度和气体比例要保持稳定,定期校准;
3. 每天检查并记录细胞培养的环境参数,如温度、pH值、气体比例等,以便及时发现问题;
4. 定期更换培养基,保持细胞营养充足;
5. 对于生长缓慢的细胞株,可以尝试进行克隆筛选或更换培养基。
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