
2×HiFi Master Mix(Dye Plus)包含HiFi DNA Polymerase、dNTP、Mg2+及经过优化的缓冲体系,扩增效率高,扩增速度快,具有高保真性和高特异性,仅需加入引物和模板即可进行扩增,减少了繁琐的试验操作,提高了实验操作效率和结果的复现性。2×HiFi Master Mix(Dye Plus)扩增产物可以直接进行电泳,产品如用于克隆,需经纯化去除PCR产物中的染料。本产品的 PCR 产物均为平末端,可用于高保真PCR,基因定点突变,平端克隆,复杂模板,长片段扩增,高通量建库等。

1. 配制检测试剂
试剂 | 体积 | 终浓度 |
2×HiFi Master Mix(Dye Plus) | 25ul | 1x |
正向引物(10μM) | 1~2ul | 0.2~0.4μM* |
反向引物(10μM) | 1~2ul | 0.2~0.4μM* |
模板 DNA | X ul** | / |
DNase-free Water | As required | / |
Total Volume | Up to 50ul | / |
*通常每条引物终浓度为0.2~0.4μM,效果不佳时也可在0.1~1μM间进行调整。
**基因组 DNA 推荐用量为10~400ng,模板为质粒或病毒DNA时,推荐用量为10pg~20ng。
2. 反应程序设置
95℃ | 3~5min | 预变性 |
95℃ | 15sec | 30~35cycles |
58℃* | 20sec | |
72℃ | 2~4kb/min | |
72℃ | 5min | 终延伸 |
*退火温度需要根据引物的Tm值进行调整,一般设置成低于引物Tm值3~5℃。

1.请于使用前确保产品完全解冻,彻底混匀后短暂离心,置于冰上备用。
2.少次反复冻融不会影响产品性能,过多次反复冻融可能会影响产品的性能。
3.本试剂仅用于科研领域,不适用于临床诊断或其他用途。
4.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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解决方案:优化引物设计,提高退火温度。或使用探针法(如TaqMan)提高特异性。
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