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答：如果能够排除下面的几个问题，那么问题多半出现在一抗和抗原制备上。
1、二抗的HRP 活性太强，将底物消耗光；
2、ECL底物中H2O2不稳定，失活；
3、ECL底物没覆盖到相应位置；
4、一抗选择不当；
5、二抗失活。
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