Western及IP裂解液是一种在非变性条件下裂解细胞或组织样品从而制备蛋白样品的裂解液。本裂解液裂解的细胞或组织样品,可以用于PAGE,Western,免疫沉淀(IP)、免疫共沉淀(co-IP)和ELISA等。
本产品可以用于动物、植物的细胞或组织样品,也可以用于真菌或细菌样品。
Western及IP裂解液的主要成分为Tris(pH7.5),NaCl,1% Triton X-100,以及焦磷酸钠,β-甘油磷酸,EDTA,原钒酸钠,leupeptin等多种蛋白酶抑制剂,可以有效抑制蛋白的降解,并维持原有的蛋白间相互作用。
用Western及IP裂解液裂解得到的蛋白样品,可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的Triton X-100等干扰物质,不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。
保存条件:-20℃保存,一年有效。
货号 名称 规格
PMK0209 Western及IP裂解液 100ml/500ml
a.每袋粉剂可配制成 1000ml 的标准浓度的 Western 转膜缓冲液。
b.配制时用去离子水或双蒸水作为溶剂。同时备有无水甲醇。
c.将包装袋中的粉剂全部溶于 600ml 的去离子水或者蒸馏水中,并定容至 800ml。
d.使用前再加入 200ml 甲醇混匀。使用前 4℃预冷,转膜效果更好。没有用完的快速转膜液可在常温或 4℃保
存,通常两周内可以正常使用。当转膜液颜色变为浅棕色或黄褐色时,应该丢弃。
e.400mA 恒流,20-25 分钟完成转膜,推荐使用恒流转膜。对于大分子量蛋白,可适当增加转膜时间。由于使
用本产品时产热少,转膜时可以仅在转膜槽内用冰盒降温即可。如果同时将整个转膜槽置于冰浴中降温,转
膜效果更佳。
复融后的试剂请及时使用,避免裂解液中有效成分失效。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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答:可能的原因有:
1、目的蛋白有多个修饰位点,本身可以呈现多条带,建议查阅文献或进行生物信息学分析,获得蛋白序列的修饰位点信息,通过去修饰确定蛋白实际大小;
2、样本处理过程中目的蛋白发生降解,建议加入蛋白酶抑制剂;样本处理时在冰上操作;
3、杂蛋白多,建议处理目的蛋白;
4、抗体特异性不强,建议使用特异性强的抗体;
5、抗体孵育时间过久,建议减少抗体孵育时间;
6、二抗与抗原有交叉反应,建议选择合适的封闭物;
7、二聚体或多聚体存在,建议增加蛋白质变性过程及强度;
8、底物显色与曝光时间过长,建议缩短显色及曝光的时间。
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