RIPA(强)裂解液是一种传统的细胞组织快速裂解液。RIPA 裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的 PAGE、
Western、免疫沉淀(IP)、免疫共沉淀(co-IP)和 ELISA 等。
本产品可以用于动物、植物的细胞或组织样品，也可以用于真菌或细菌样品。
RIPA(强)裂解液的主要成分为 Tris(pH7.4)，NaCl，1% Triton X-100，1% 脱氧胆酸钠，0.1% SDS，以及原钒
酸钠，氟化钠，EDTA，leupeptin 等多种抑制剂，可以有效抑制蛋白降解。
用 RIPA(强)裂解液裂解得到的蛋白样品，可以用 BCA 蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的
去垢剂，不能用 Bradford 法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。

（一）贴壁培养细胞
1、取 RIPA(强)裂解液置室温融解混匀，加入 PMSF，使 PMSF 终浓度为 1mM。
2、去除贴壁细胞的培养液，用 PBS、生理盐水或无血清培养液清洗 1 次，低速离心，弃上清，留取沉淀。
3、按照 6 孔板每孔加入 150～250μl 含有 PMSF 的 RIPA(强)裂解液，移液器轻轻吹打，使裂解液和细胞充分接
触。置于冰上或 4℃裂解，通常裂解液作用于细胞 1～3s 内，细胞就会被裂解。
4、10000～12000g，4℃离心 5～10min（如无低温离心机，室温下离心亦可），取上清。
5、后续的 SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
（二）悬浮培养细胞
1、取 RIPA(强)裂解液置室温融解混匀后，加入 PMSF，使 PMSF 终浓度为 1mM。
2、低速离心悬浮细胞，弃上清，收集沉淀。

3、用手指轻弹细胞，使其松散。按照 6 孔板每孔细胞加入 150～250μl 含有 PMSF 的 RIPA(强)裂解液，如果细
胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到 200～250μl。再用手指轻弹以充分裂解细胞，充分裂解后应没有明
显的细胞沉淀。
4、10000～12000g，4℃离心 5～10min（如无低温离心机，室温下离心亦可），取上清。
5、进行后续的 SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
（三）组织样本
1、 取 RIPA(强)裂解液置室温融解混匀后，加入 PMSF，使 PMSF 终浓度为 1mM。
2、把组织剪切成细小的碎片，越小越好。
3、 取在液氮或超低温冰箱中冷冻 30min 以上的组织，迅速研磨，研磨过程尽量控制在 1～2min 之内，以减少蛋
白的降解。
4、 按照每 20mg 组织加入 150～250μl 裂解液的比例，加入含有 PMSF 的裂解液，冰上或 4℃裂解 15～30min。
5、 步骤 3、4 亦可以采用如下过程：按照每 20mg 组织加入 150～250μl 裂解液的比例加入含有 PMSF 的 RIPA(强)
裂解液。用玻璃匀浆器或组织研磨器匀浆，直至充分裂解，该过程尽量控制在 1～2min 之内，以减少蛋白的降解。
6、10000～12000g，4℃离心 5～10min（如无低温离心机，室温下离心亦可），取上清。
7、进行后续的 SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

1. 为取得佳的使用效果，尽量避免过多的反复冻融。
2. 抽提蛋白的所有步骤都需在冰上或 4℃进行。
3. 建议在临用前数分钟内加入 PMSF，使 PMSF 的终浓度为 1mM。PMSF 可以向我公司订购。
3. 在贴壁培养细胞的操作步骤中，去除贴壁细胞的培养液后，如果血清中的蛋白没有干扰，可以不用清洗。
4. 如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。
5. 如果细胞量较多，必须分装成 50~100 万细胞/离心管然后再裂解。大团的细胞较难裂解充分，而少量的细胞
由于裂解液容易和细胞充分接触，相对容易裂解充分。
6. 如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液中裂解，通过强烈 vortex 使样品裂解充分。然
后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器或研磨设备，缺点是不如匀浆
器或研磨那样裂解得比较充分。
7. 如果希望获得更好的裂解效果，细菌和酵母可以分别使用溶菌酶和破壁酶消化，然后再使用本裂解液进行裂
解。
8. RIPA 裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组 DNA 等的
复合物。在不检测和基因组 DNA 结合特别紧密的蛋白的情况下，可以直接离心取上清用于后续实验；如果需要检
测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物，随后离心取上清用于后续实验。
9. 复融后的试剂请及时使用，避免裂解液中有效成分失效。
10. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住
宅内。
11. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。