本品为即用型1 × , 主要针对多因子实验(CBA\Luminex\MSD) 的组织和细胞样本进行裂解作用,其中不包含SDS和NP40等去垢剂成分,有效提高检出效率。
NaCl 、Tris(pH=7. 5) 、EDTA 、EGTA和Triton-X- 100
1 、组织样本:每10mg加入100ul本品进行裂解针对组织。
利用组织处理器或者其他组织处理装置,处理样本,保证样本处理完全。
2 、细胞样本:每107细胞加入200ul本品进行裂解,4℃静置20-30min。
3 、将裂解收的样品10000 - 14000rpm ,4℃离心10min ,取上清(建议组织裂解液离心两次)。
4 、取上清做BCA总蛋白浓度测定,完成后续操作。
1.本产品仅供科研使用,请勿用于医药、临床诊断或治疗,食品及化妆品等用途
2.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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答:可能的原因有:
1、目的蛋白有多个修饰位点,本身可以呈现多条带,建议查阅文献或进行生物信息学分析,获得蛋白序列的修饰位点信息,通过去修饰确定蛋白实际大小;
2、样本处理过程中目的蛋白发生降解,建议加入蛋白酶抑制剂;样本处理时在冰上操作;
3、杂蛋白多,建议处理目的蛋白;
4、抗体特异性不强,建议使用特异性强的抗体;
5、抗体孵育时间过久,建议减少抗体孵育时间;
6、二抗与抗原有交叉反应,建议选择合适的封闭物;
7、二聚体或多聚体存在,建议增加蛋白质变性过程及强度;
8、底物显色与曝光时间过长,建议缩短显色及曝光的时间。
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