增强型BCA蛋白定量试剂盒的原理是蛋白质分子中肽键结构在碱性条件下将二价铜离子还原为一 价铜离子，一价铜离子与BCA分子形成紫色络合物。此络合物可用540 -590nm波长检测，并在562nm处有大 的光吸收值 。反应物的颜色和蛋白质浓度在一定范围内具有线性关系，故可以根据吸光度值的大小来测定蛋 白的含量 。该方法快速灵敏 、稳定可靠，对不同种类蛋白质检测的变异系数非常小 ，倍受专业人士青睐。 BCA法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响，在组织细胞裂解实验中，对于5%浓度以内的去 垢剂SDS ，TritonX- 100 ，Tween20 ，Tween80具有很好的兼容性，但易受螯合剂(EDTA，EGTA) 、还原剂(DTT、 巯基乙醇)和脂类的影响。每个试剂盒少可以检测500个样品。

室温保存，蛋白标准品-20℃保存，一年内有效。

检测范围：在0.025-2mg/ml浓度范围内有较好的线性关系。

检测灵敏度：检测浓度下限为25ug/mL 。

1、BCA试剂在低温条件下出现结晶沉淀时，可37℃温浴使其溶解，不影响使用。

2、待测蛋白溶解于什么样的稀释液中 ，蛋白标准品也宜溶解于什么样的稀释液中 ， 否则待测蛋白与蛋白标准品中所含非蛋白成分不一致 ，有可能导致测定不准确。

3、待测蛋白和蛋白标准品加入BCA工作液后 ，若发现检测效果不佳 ，可以室温放置2h 或60 ℃放置30 min ，颜色会随着时间的延长不断加深 ， 并且显色反应也会随温度升高而加快 。如果待测蛋白浓度较低 ，可以适当延长孵育时间或在较高温度下孵育 ，但是切勿过热 ， 否则易失效。

4、建议每次测定时都做标准曲线 。 因为BCA法测定时颜色会随着时间的延长不断加深 ， 并且显色反应的速度和温度有关 ，所以除非精确控制显色反应的时间和温度 ， 否则如需精确测定需每次都做标准曲线 。要想得到更为精确的蛋白浓度结果 ，建议每个蛋白标曲梯度和样品均做复孔。

5、如发现样品稀释液或裂解液本身就有较高背景 ，请试用Bradford 蛋白定量试剂盒（PMK0443 ）。

6、本试剂盒受螯合剂和略高浓度的还原剂影响 ， 需确保EDTA低于10 mM ，无EGTA ，二硫苏糖醇（DTT）低于1mM ， β - 巯基乙醇低于0 .01% ，不适用BCA法时建议试用Bradford蛋白定量试剂盒（PMK0443 ）。

7、如果没有酶标仪 ，也可以使用普通的分光光度计测定 ，但测定时 ， 需根据比色皿的小检测体积 ，按比例 适当加大BCA工作液的用量使总体积不小于小检测体积 ，样品和标准品的用量亦相应按比例放大 。使用分光光度计测定蛋白浓度时 ，每个试剂盒可以测定的样品数量可能会显著减少。

8、本产品仅限于专业人员的科学研究用 ，不得用于临床诊断或治疗 ，不得用于食品或药品 ，不得存放于普通住宅内。

9、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。