1、BCA试剂在低温条件下出现结晶沉淀时,可37℃温浴使其溶解,不影响使用。
2、待测蛋白溶解于什么样的稀释液中 ,蛋白标准品也宜溶解于什么样的稀释液中 , 否则待测蛋白与蛋白标准品中所含非蛋白成分不一致 ,有可能导致测定不准确。
3、待测蛋白和蛋白标准品加入BCA工作液后 ,若发现检测效果不佳 ,可以室温放置2h 或60
℃放置30 min ,颜色会随着时间的延长不断加深 , 并且显色反应也会随温度升高而加快 。如果待测蛋白浓度较低 ,可以适当延长孵育时间或在较高温度下孵育 ,但是切勿过热 , 否则易失效。
4、建议每次测定时都做标准曲线
。
因为BCA法测定时颜色会随着时间的延长不断加深 , 并且显色反应的速度和温度有关 ,所以除非精确控制显色反应的时间和温度 , 否则如需精确测定需每次都做标准曲线 。要想得到更为精确的蛋白浓度结果 ,建议每个蛋白标曲梯度和样品均做复孔。
5、如发现样品稀释液或裂解液本身就有较高背景 ,请试用Bradford 蛋白定量试剂盒(PMK0443 )。
6、本试剂盒受螯合剂和略高浓度的还原剂影响 , 需确保EDTA低于10 mM ,无EGTA ,二硫苏糖醇(DTT)低于1mM , β - 巯基乙醇低于0 .01% ,不适用BCA法时建议试用Bradford蛋白定量试剂盒(PMK0443 )。
7、如果没有酶标仪 ,也可以使用普通的分光光度计测定 ,但测定时 , 需根据比色皿的小检测体积 ,按比例 适当加大BCA工作液的用量使总体积不小于小检测体积 ,样品和标准品的用量亦相应按比例放大 。使用分光光度计测定蛋白浓度时 ,每个试剂盒可以测定的样品数量可能会显著减少。
8、本产品仅限于专业人员的科学研究用 ,不得用于临床诊断或治疗 ,不得用于食品或药品 ,不得存放于普通住宅内。
9、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。