本产品的主要有效成分为经过反复优化的适量BSA、适当的去垢剂和二抗稳定试剂等,一方面能有效减少二抗的非特异性结合,另一方面能有效提升稀释后二抗的稳定保存时间。
按照每个二抗稀释10毫升计算,一个包装的Western二抗稀释液可以稀释10个或10次二抗。
参考所用的二抗的使用说明,以及一抗的质量和样品中目的蛋白的含量,按照适当比例例如1:1000、1:500等比例稀释二抗。二抗稀释后即可直接用于Western。一次Western结束后,可以回收稀释的二抗,4℃保存,以用于下次的Western,通常在1-2周内可以重复使用3-5次。
本Western二抗稀释液经过滤除菌处理,使用过程中应尽量避免细菌污染。一旦启用后建议在一个月内用完,如果发现有沉淀或细菌污染请弃用。本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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答:可能的原因有:
1、目的蛋白有多个修饰位点,本身可以呈现多条带,建议查阅文献或进行生物信息学分析,获得蛋白序列的修饰位点信息,通过去修饰确定蛋白实际大小;
2、样本处理过程中目的蛋白发生降解,建议加入蛋白酶抑制剂;样本处理时在冰上操作;
3、杂蛋白多,建议处理目的蛋白;
4、抗体特异性不强,建议使用特异性强的抗体;
5、抗体孵育时间过久,建议减少抗体孵育时间;
6、二抗与抗原有交叉反应,建议选择合适的封闭物;
7、二聚体或多聚体存在,建议增加蛋白质变性过程及强度;
8、底物显色与曝光时间过长,建议缩短显色及曝光的时间。
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