免疫染色一抗稀释液(Immunol Staining Primary Antibody Dilution Buffer)可以用于免疫染色时一抗(primary antibody)的稀释和配制;使用本产品稀释和配制的一抗可以在 4℃保存6 个月,可以反复多次用于免疫染色,按照每个一抗稀释 10ml 计算,100ml 免疫染色一抗稀释液可以稀释10 次一抗。
1.参考所用的一抗的说明书,以及样品中目的蛋白的含量,按照适当比例稀释一抗。
2.一抗稀释后即可直接用于免疫染色。
3.一次免疫染色结束后,可以回收稀释的一抗,4℃保存,以用于下次的免疫染色。
1.为了能使抗体可以反复多次使用,建议尽量在 4C 进行一抗和蛋白膜的结合反应,以减缓一抗的衰减速度。
2.本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
3.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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答:可能的原因有:
1、目的蛋白有多个修饰位点,本身可以呈现多条带,建议查阅文献或进行生物信息学分析,获得蛋白序列的修饰位点信息,通过去修饰确定蛋白实际大小;
2、样本处理过程中目的蛋白发生降解,建议加入蛋白酶抑制剂;样本处理时在冰上操作;
3、杂蛋白多,建议处理目的蛋白;
4、抗体特异性不强,建议使用特异性强的抗体;
5、抗体孵育时间过久,建议减少抗体孵育时间;
6、二抗与抗原有交叉反应,建议选择合适的封闭物;
7、二聚体或多聚体存在,建议增加蛋白质变性过程及强度;
8、底物显色与曝光时间过长,建议缩短显色及曝光的时间。
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