碳菁染料胺反应性
花青染料是一系列反应性荧光染料，广泛用于标记肽、蛋白质、核苷酸和核酸。花青染料是具有良好水溶性的明亮荧光信号的单个家族。与荧光素和羟基香豆素不同，它们的激发和发射与 pH 值无关。在花青染料中，花青 3 染料在与蛋白质结合时荧光增强，而其他花青由于蛋白质中富电子氨基酸（如 Trp、His 和 Tyr 等）的猝灭作用而荧光减弱。
一般来说，花青染料具有以下特点：
良好的水溶性使标记反应能够在水性介质中方便地进行，而无需使用有机溶剂（如 DMF 或 DMSO）作为助溶剂。所得偶联物的低非特异性结合有助于检测开发。
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答：如果能够排除下面的几个问题，那么问题多半出现在一抗和抗原制备上。
1、二抗的HRP 活性太强，将底物消耗光；
2、ECL底物中H2O2不稳定，失活；
3、ECL底物没覆盖到相应位置；
4、一抗选择不当；
5、二抗失活。
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