该试剂盒采用双抗夹心酶联免疫吸附法原理。酶标板预包被亲和纯化的抗小鼠IL-5的抗体。将含有小鼠IL-5的样品或标准品加入到酶标板中,与包被抗体反应。再加入生物素标记的检测抗体,并与酶标板上捕获的小鼠IL-5结合。接着,加入链霉亲和素-辣根过氧化物酶(SA-HRP)以形成固相抗体-小鼠IL-5-生物素标记抗体-SA-HRP的夹心复合物。然后,将 TMB 溶液加入孔中并进行孵育,酶促反应产生蓝色物质,加入终止液后,变成黄色。在 450nm 波长下测定吸光值。后通过建立标准曲线,根据 OD 值来计算样品中小鼠IL-5的浓度。
酶标仪(能测 450nm 处的吸光度)
多通道移液器或自动洗板机
恒温箱、低温离心机
可调节式移液枪及枪头
去离子水
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可能原因 解决措施是
1,标准品稀释不正确。 确保标准品按照推荐方法溶解和稀释。
2,移液不准确。 定期校准移液器并检查枪头密封性。
3,反应液蒸发。 用封板膜密封酶标板。
4,洗板不彻底。 足够的洗涤次数和加入足量洗涤液。
5,孔底有异物。 读数前清洁板底。
可能原因 解决措施是
1,试剂反应不充分 确保孵育时间并按推荐温度孵育
2,试剂体积添加不足 检查移液器并严格按照操作步骤操作
3,稀释不正确 检查试剂稀释步骤
4,酶结合物失活 混合酶结合物和底物,通过显色反应检查
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