该试剂盒采用竞争ELISA法。酶标板预包被5-羟色胺(5-HT)抗原。将待测抗原(标准品或样本)和生物素标记的抗5-羟色胺(5-HT)抗体加入到酶标板中,样品或标准品中的5-羟色胺(5-HT)与包被的5-羟色胺(5-HT)竞争生物素标记的抗5-羟色胺(5-HT)抗体上的结合位点。接着洗涤去除未结合的物质,加入链酶亲和素-辣根过氧化物酶(SA-HRP)以形成固相抗原-生物素标记抗体-SA-HRP的复合物。然后,将TMB 溶液加入孔中并进行孵育,酶促反应产生蓝色物质,加入终止液后,变成黄色。颜色深浅与样本中待测抗原的含量呈现负相关。在450nm 波长下测定吸光值。后通过建立标准曲线,根据OD值来计算样品中5-羟色胺(5-HT)的浓度。
酶标仪(能测 450nm 处的吸光度)
多通道移液器或自动洗板机
恒温箱、低温离心机
可调节式移液枪及枪头
去离子水
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解决方案:调整底物浓度。
解决方案:
1.使用高特异性抗体。
2.优化封闭步骤,如延长封闭时间。
解决方案:
1.增加包被抗原或抗体浓度。
2.更换新抗体。
3.确保底物新鲜。
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