产品简介:
增强型BCA蛋白定量试剂盒的原理是蛋白质分子中肽键结构在碱性条件下将二价铜离子还原为一 价铜离子，一价铜离子与BCA分子形成紫色络合物。此络合物可用540 -590nm波长检测，并在562nm处有最大 的光吸收值 。反应物的颜色和蛋白质浓度在一定范围内具有线性关系，故可以根据吸光度值的大小来测定蛋 白的含量 。该方法快速灵敏 、稳定可靠，对不同种类蛋白质检测的变异系数非常小 ，倍受专业人士青睐。 BCA法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响，在组织细胞裂解实验中，对于5%浓度以内的去 垢剂SDS ，TritonX- 100 ，Tween20 ，Tween80具有很好的兼容性，但易受螯合剂(EDTA，EGTA) 、还原剂(DTT、 巯基乙醇)和脂类的影响。每个试剂盒最少可以检测500个样品。
保存：室温保存，蛋白标准品-20℃保存，一年内有效。
产品特点：
检测范围：在0.025-2mg/ml浓度范围内有较好的线性关系。
检测灵敏度：检测浓度下限为25ug/mL 。
产品内容：
产品编号 | 名称 | 500T | 1000T |
PMK0442 - 1 | BCA试剂A | 100mL | 200mL |
PMK0442 -2 | BCA试剂B | 3mL | 6mL |
PMK0442 - 3 | BSA标准溶液(5 mg/ ml) | 2 x 1ml | 2 x 1ml |
PMK0442 -4 | PBS溶液 | 10ml | 10ml |
操作说明：
一、微孔板测定程序：
1、蛋白标准品配制： 室温完全溶解蛋白标准品，取20ul 5mg/ml BSA 蛋白标准溶液用PBS溶液稀释100ul ，使 其终浓度为1.0mg/ml。
2、按照下表配制BSA标准测定溶液：
编号 | 0 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 |
1mg/ml BSA 标准溶液（ uL） | 5mg/ml BSA 标准溶液（uL） | ||||||||
BSA标准溶液（uL） | 0 | 0.5 | 2.5 | 5.0 | 10 | 15 | 20 | 6 | 8 |
PBS溶液（uL） | 20 | 19.5 | 17.5 | 15 | 10 | 5 | 0 | 14 | 12 |
BSA终浓度（ug/ml） | 0 | 25 | 125 | 250 | 500 | 750 | 1000 | 1500 | 2000 |
总体积（uL） | 20 | ||||||||
3、将适当体积的待测样品加入到微孔板中 ， 并用PBS补足到20 ul
4、向微孔板中加入200ul BCA工作液，混匀，37℃放置30分钟；
注： 也可以室温放置2小时 ，或60 ℃放置30 分钟 。BCA法测定蛋白浓度时 ，颜色会随着时间的延长不断加深 ， 并且显色反应会因温度升高而加快 。如果浓度较低 ，适合在较高温度孵育 ，或适当延长孵育时间。
5、测定562nm处的吸光值，并记录读数； 以不含BSA的样品的光吸收值作为空白对照。
6、以A562为纵坐标 ，BSA含量为横坐标 ，绘制标准曲线 ，计算样品中的蛋白浓度 。如果所得到的蛋白浓度不在标准曲线范围内，请稀释样品后重新测定。
二、试管测定程序：
1、蛋白标准品配制： 室温完全溶解蛋白标准品 ，取150ul 5mg/ml BSA蛋白标准溶液，加入600ul PBS溶液稀释至750µl ，使其终浓度为1.0mg/ml。
2、按照下表配制BSA标准测定溶液：
编号 | 0 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 |
1mg/ml BSA 标准溶液（ uL） | 5 mg/ ml BSA 标准溶液(uL） | ||||||||
BSA标准溶液（uL） | 0 | 2.5 | 12.5 | 25 | 50 | 75 | 100 | 30 | 40 |
PBS溶液（uL） | 100 | 97.5 | 87.5 | 75 | 50 | 25 | 0 | 70 | 60 |
BSA终浓度（ug/ml） | 0 | 25 | 125 | 250 | 500 | 750 | 1000 | 1500 | 2000 |
总体积（uL） | 100 | ||||||||
3、将适当体积的待测样品加入到试管中，并用PBS补足到100 ul；
4、向试管中加入2ml BCA工作液，混匀，37℃放置30分钟；
5、6步骤同上。
注意事项：
1、BCA试剂在低温条件下出现结晶沉淀时，可37℃温浴使其溶解，不影响使用。
2、待测蛋白溶解于什么样的稀释液中 ，蛋白标准品也宜溶解于什么样的稀释液中 ， 否则待测蛋白与蛋白标准品中所含非蛋白成分不一致 ，有可能导致测定不准确。
3、待测蛋白和蛋白标准品加入BCA工作液后 ，若发现检测效果不佳 ，可以室温放置2h 或60 ℃放置30 min ，颜色会随着时间的延长不断加深 ， 并且显色反应也会随温度升高而加快 。如果待测蛋白浓度较低 ，可以适当延长孵育时间或在较高温度下孵育 ，但是切勿过热 ， 否则易失效。
4、建议每次测定时都做标准曲线 。 因为BCA法测定时颜色会随着时间的延长不断加深 ， 并且显色反应的速度和温度有关 ，所以除非精确控制显色反应的时间和温度 ， 否则如需精确测定需每次都做标准曲线 。要想得到更为精确的蛋白浓度结果 ，建议每个蛋白标曲梯度和样品均做复孔。
5、如发现样品稀释液或裂解液本身就有较高背景 ，请试用Bradford 蛋白定量试剂盒（PMK0443 ）。
6、本试剂盒受螯合剂和略高浓度的还原剂影响 ， 需确保EDTA低于10 mM ，无EGTA ，二硫苏糖醇（DTT）低于1mM ， β - 巯基乙醇低于0 .01% ，不适用BCA法时建议试用Bradford蛋白定量试剂盒（PMK0443 ）。
7、如果没有酶标仪 ，也可以使用普通的分光光度计测定 ，但测定时 ， 需根据比色皿的最小检测体积 ，按比例 适当加大BCA工作液的用量使总体积不小于最小检测体积 ，样品和标准品的用量亦相应按比例放大 。使用分光光度计测定蛋白浓度时 ，每个试剂盒可以测定的样品数量可能会显著减少。
8、本产品仅限于专业人员的科学研究用 ，不得用于临床诊断或治疗 ，不得用于食品或药品 ，不得存放于普通住宅内。
9、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
