产品简介：
3,3',5,5'-四甲基联苯胺(TMB)是非常优越的酶免试验显色剂，能溶解于多种有机溶剂和双蒸水中，为稳定的无色溶液，与适量过氧化脲或双氧水与缓冲液混匀后与过氧化物酶作用产生清晰的蓝色产物，极易观察。由于其灵敏度高，配制后的工作液稳定，加上无致癌特性，被广泛用于酶联免疫(ELISA)试验和尿试纸的检测反应等，TMB 主要应用于酶联免疫吸附实验(ELISA)，经典的方法是采用A、B液分开配制，使用前再混合的方法，并且长期存放稳定，本试剂一般情况下为无色，有时略显浅蓝色或浅黄色。
双组分TMB底物显色液(ELISA,HRP显色)主要由TMB显色液A液和B液组成，其特点是：1、灵敏度高；2、稳定性好，显色终止后读数稳定；3、背景低：底物溶液在450nm检测时OD值一般小于0.05。该试剂仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
产品内容：
组分名称 PMK0070-50 PMK0070-100 保存条件
TMB显色液A液 50ml 100ml 4℃避光
TMB显色液B液 50ml 100ml 4℃避光
使用步骤：
检测前取适当的干净容器(用纯净水反复冲洗)，取TMB显色液A液和B液按A：B= 1:1的比例混合，即为TMB 显色工作液，待达到室温后即可使用。
1. 对于ELSIA检测：
a. 参考ELISA试剂盒的实验步骤，在与辣根过氧化物酶标记的抗体孵育后，用适当洗涤液洗涤3-5次，每次3-5分钟。
b. 洗涤完毕后，去除洗涤液，加入100微升TMB显色工作液。
c. 室温避光孵育3-30分钟或更长时间(可长达24小时)，直至显色至预期深浅。
d. 直接在370nm或620-650nm测定吸光度。加入100微升TMB显色终止液(450nm) 或自行配制2M H2SO4终止反应，随后在相应波长测定吸光度。
2. 对于在96孔板内进行的其他适当检测 (例如检测组织或细胞样品内源性的过氧化物酶)：
a. 直接在96孔板内每孔加入10-20微升样品。
b. 加入100微升TMB显色工作液。
c. 室温避光孵育3-30分钟或更长时间(可长达24小时)，直至显色至预期深浅。
d. 直接在370nm或620-650nm测定吸光度。加入100微升TMB显色终止液(450nm) 或自行配制2M H2SO4终止反应，随后在相应波长测定吸光度。
常见问题：
1. 背景显色太深。
a. 如果背景(没有样品的对照)显色太深，一方面需考虑使用适当的封闭液进行封闭，例如选购适当的封闭液或使用和一抗相同来源的血清(10%)进行封闭。另一方面，请选购经过适当吸附的二抗，以减小二抗的非特异性吸附。
b. 可以考虑缩短显色时间，或降低二抗浓度。另外，选择适当强度的洗涤液，或延长洗涤时间也会有所帮助。
2. 没有显色或显色太弱。
a. 适当提高一抗或二抗的浓度。检测二抗效果，滴一滴稀释二抗在离心管内，检测二抗是否可以被正常显色。
b. 可以考虑使用更加灵敏的放大检测体系，例如使用生物素检测体系。
c. 可以适当延长显色时间。
d. 如果上述改进不能获得预期效果，可以考虑更换效果更好的一抗或ELISA试剂盒。
注意事项：
TMB对人体有刺激性，请注意适当防护。
本产品为无色至微蓝色透明溶液，如果发现TMB辣根过氧化物酶显色液出现混浊或颜色变成较深的蓝色，应该停止使用。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
