产品简介:
在组织切片过程中,一些组织内含有骨质或钙化灶时,含钙的组织不宜直接用石蜡包埋切片。这是因为钙和石蜡之间的密度不同,较难切出完整的切片。对含钙组织最好固定之后,再进行脱钙或二者同时进行。然后进行下游操作如脱水、透明、浸蜡、包埋、切片。用于脱钙的试剂很多,脱钙剂包括有机酸、无机酸、乙二胺四乙酸(EDTA)以及电解法脱钙。EDTA是一种相对较好的螯合脱钙剂,对组织结构影响最小,可以较好的保存组织的某些酶类,经EDTA 脱钙后的组织可以进行免疫组化和原位杂交染色。但是该法脱钙速度太慢,一般脱需要数周至数月。JYBL -Ⅰ脱钙液主要由稀酸、甲醛、甲酸等组成。
其优点是:①作用迅速,24~36h即可;②对组织的结构损害小;③脱钙完全。该脱钙液特别适用于日常病理科骨组织标本的脱钙,但不宜用化学方法确定脱钙终点。
操作步骤:
1. 骨组织脱钙时,取材不易过厚,一般大约5mm。
2. 组织固定后,用PBS清洗3次,每次20min。
3. 组织用蒸馏水洗清洗3次,每次20min。
4. 组织转移至20~30倍体积的JYBL-Ⅰ脱钙液中,脱钙24~36h。如果想加快脱钙速度,可以置于37℃进行脱钙。
5. 用蒸馏水冲洗数次。
6. 常规脱水、包埋。
注意事项:
1. 厚度5mm的骨组织块脱钙时间一般脱钙24~36h即可。
2. 适当加温能加快脱钙的速度,一般不应超过37~40℃,温度过高容易使骨组织造成松散解体,尤其不可大于60℃。
3. 脱钙应彻底,防止脱钙不足或过度。脱钙程度应控制在不影响组织切片的同时尽量缩短脱钙时间,以免脱钙过长引起组织损害。
4. 脱钙用具避免使用金属容器,尽量使用玻璃容器。
5. 骨组织脱钙应先固定后脱钙或脱钙固定同时进行,不应先脱钙后固定,以便减少组织的损伤程度。
6. 每隔一段时间检测一次脱钙程度,脱钙过度会增加组织的损伤程度,影响染色结果。
7. 脱钙终点的测定(物理法):采用针刺、手掐、钳夹等方法,当骨组织变软或针刺时没有阻力感即可终止脱钙。物理检测法会对组织结构有一定的损害,尽量避免用力过大或反复检测。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。