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Trizol总RNA提取试剂盒(免氯仿)

货号:PMK0833
规格:50ml/100ml
价格:280元/400元
库存:999
产品描述 常见问题 参考文献 相关产品推荐

货号:PMK0833

保存:4℃避光保存,有效期12个月。

规格:50ml/100ml

用途:适用于从各种组织或细胞中快速分离总 RNA ,既可用于小量样品(50~100mg 组织、5x106细胞) ,也可 用于大量样品(>1g 组织/>108细胞)。。


产品简介:

Trizol总RNA提取试剂盒是本公司自主研发和生产的用于细胞或组织的总 RNA提取试剂。Trizol含酚和异硫氰酸胍等物质,具有极强的裂解能力,可在短时间内裂解细胞和组织样本,并有效抑制RNase活性,从而有效防止RNA在提取过程中的降解,保证RNA的完整性。同时本产品使用氯仿替代物替代氯仿,毒性小,操作更安全。加入氯仿替代物离心后,溶液形成上清层为水相(无色) 、中间层、下层为有机相 ,上清层用异丙醇沉淀回收总 RNA ,中间层用乙醇沉淀回收 DNA ,下层用异丙醇沉淀回收蛋白。

本产品适用于次生代谢较少的植物组织(如幼苗、幼叶等)、培养细胞、动物组织、微生物。提取过程可在1h内完成,提取的总 RNA纯度高、完整性好,最大限度的去除了蛋白质和基因组DNA等杂质,可以直接用于RT-PCR、Northern Blot、体外翻译及mRNA纯化等实验。

本产品安全性高:使用氯仿替代物替代氯仿,毒性较小;适用范围广;操作简单省时,整个过程可在1h内完成;提取的RNA纯度高、污染少。


产品组成:

货号                                                  PMK0833-50                    PMK0833-100

Trizol 总 RNA 提取试剂                           50ml                                  100ml

氯仿替代物                                               5ml                                    10ml  

 

操作步骤(仅供参考):

1. 自备试剂RNase 、无水乙醇、异丙醇、DEPC处理水等。

2.   细胞裂解或组织匀浆。

(1) 贴壁细胞:吸尽培养液,每10cm2细胞加入1ml Trizol。一般6 孔板每孔加1ml,12孔板每孔加 0.5ml,晃动 3-5下,再用枪吹打2-3下,确保全部裂解,然后吸至离心管中。

(2) 悬浮细胞:离心收集细胞,吸尽液体,每5x106~ 107动植物或酵母细胞或每107细菌细胞加入1ml Trizol。用枪吹打或适当涡旋振荡,确保全部裂解。某些酵母和细菌如裂解不充分,可用匀浆器匀浆,确保全部裂解。

(3) 植物组织:植物叶片直接放入研钵中,加入少量液氮,迅速研磨成粉末,每50-100mg植物叶片加入1ml Trizol。

注:经典模式植物如拟南芥、烟草、小麦、玉米等植物叶片能很好地提取RNA;但一些多糖多酚植物,如西红柿、棉花、毛白杨等,不能使用Trizol提取 RNA。

(4) 动物组织:按10-30mg组织加入1ml Trizol,用电动匀浆器或者一次性研磨杵充分匀浆。

2. 对于某些蛋白,多糖或脂含量很高的细胞或组织,Trizol裂解后可能会有不溶物或油脂状漂浮物。需12,000g,4℃离心10分钟,然后吸取澄清的裂解产物至一新的离心管中。

3. 室温放置 5 分钟,使样品充分裂解。

4. 每毫升Trizol加0.1ml氯仿替代物,涡旋震荡混匀或猛烈晃动15 秒,室温放置 2-3 分钟。

5. 12000g,4℃离心15分钟,吸取含总RNA的上层无色水相至一新的离心管中,每毫升Trizol约可吸取0.5-0.55ml。

6. 加入与上清等体积的预冷异丙醇,颠倒数次混匀,室温沉淀 10 分钟。如果希望提取microRNA等小 RNA,推荐-70℃沉淀过夜。

7. 12,000g,4℃离心10分钟,在管底可见RNA沉淀,弃上清。

8. 每毫升最初的Trizol加入1ml 75%乙醇(DEPC水配制),涡旋震荡或颠倒混匀。

9. 7,500g 4℃离心5分钟,弃上清。再用离心机甩一下(>5,000rpm, 离心1 秒),小心吸尽液体。

10. 待RNA晾干后,加入20-50ul DEPC水溶解,-70℃冻存。注意:切勿让RNA过分干燥,否则将极难溶解,且测出的A260/280值会低于1.6。

11. 分析与定量(选做)

①测定样品在260nm和280nm的吸收值确定 RNA 的质量,按1OD=40pgRNA 计算RNA的产率OD260/280在1.8~2.0 视为抽提RNA纯度较好,浓度在4ug/ml以上的样品适于用分光光度计测定。

②进行甲醛变性琼脂糖电泳,确定RNA的完整性和污染情况。

③核酸分析仪测定RNA的质量和纯度。


注意事项:

1 、样品保存:加入Trizol混匀后,样品可在-70℃放置1~2 月;RNA 样品可以在70%酒精中-70℃保存 2~4 周:如果需要长期保存,应置于超低温冰箱中保存。使用冻存的细胞或组织抽提总 RNA 的效果通常比新鲜的细胞或组织差一些。因为在细胞或组织冻融过程中一些细胞或组织内的RNase会被释放出来并剪切样品。如果不能及时抽提RNA,推荐先加入适量Trizol,并裂解样品后冻存。

2 、Trizol 是强腐蚀性物质,为防止溅入眼睛,请戴防护眼镜或使用透明保护屏。若不慎污染皮肤或眼睛后,立即用清水或生理盐水冲洗,必要时寻求医生的帮助。

3 、所有离心管,枪头及相关溶液都必须无 RNA酶污染。耐高温器物可150℃烘烤4小时以去除 RNA 酶,其它器物去除RNA酶可考虑用0.01%的 DEPC 水浸泡过夜,然后灭菌,烘干。溶液需用 DEPC水配制。

4 、该试剂仅用于科研领域,不适用于临床诊断或其他用途。

5 、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作,且尽量不要对着 RNA 样品说话,以防 RNA 酶污染。


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